福氏2a志贺氏菌2457T argT基因功能的研究

发布时间：2018-03-22 01:09

  本文选题：福氏2a志贺氏菌　切入点：ArgT蛋白　出处：《沈阳药科大学》2008年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 志贺氏菌属(Shigella spp.)细菌俗称痢疾杆菌,是一类不形成芽孢的革兰氏阴性杆菌,能够通过侵袭肠上皮细胞,引起以发热、腹痛、腹泻为特征的典型痢疾症状。据WHO统计,每年约有1.647亿人感染痢疾,110万人死亡,大多数为5岁以下的儿童。福氏志贺氏菌是发展中国家主要的感染菌株,2a血清是主要的血清型。在我国,每年大约有2000万人次感染痢疾,感染或大流行的痢疾杆菌中50-70%是由福氏2a志贺氏菌引起,因此,志贺氏菌的基础研究对我国卫生防疫工作尤为重要。 有研究表明,福氏2a志贺氏菌在37℃时发挥完整的细胞侵袭力,而在30℃时却不能侵袭上皮细胞。本实验室对福氏2a志贺氏菌2457T不同培养温度下全菌蛋白的比较蛋白质组研究发现:在37℃培养至稳定期时,ArgT蛋白丰度很低,而在30℃时却明显提高。ArgT蛋白又称赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸转运蛋白,定位于细胞周质间隙内,行使着将细胞外氨基酸转运到细胞内的功能。为进一步研究ArgT蛋白在志贺氏菌毒力发挥中的作用,本研究采用改进的λ-Red重组系统成功构建了argT缺失突变株,利用定点突变的方法成功构建了ArgT过表达突变株,并对所得突变株进行了一系列的研究。结果表明:ArgT对菌体的生长及代谢影响不大;对野生株和突变株进行竞争性侵袭HeLa细胞的毒力评价模型及小鼠肺部侵袭发现,argT缺失对毒力无影响,而过表达却使毒力明显下降,这些实验推测argT是福氏志贺氏菌中一个新的抗毒力基因;利用双向电泳和质谱技术对野生株和突变株进行37℃全菌蛋白的比较蛋白组学研究,检测到10个蛋白差异点,代表9种蛋白,其中ArgT过表达突变体中外膜蛋白OmpA表达下调,说明ArgT影响细菌的通透性;热休克蛋白HtrA在ArgT不同的表达体中的差异表达引起了我们的注意。利用GST-pulldown技术筛选与ArgT相互作用的蛋白,经质谱分析发现外膜蛋白调节子OmpR蛋白与之发生相互作用,并进行了WestemBlotting体外验证,结果表明两者存在相互作用。OmpR是双组分渗透压感知调节系统(OmpR/EnvZ)的一部分,是一个毒力相关因子,可以调节vir基因和OmpF/C的表达。 所以本研究得出:ArgT对福氏志贺氏菌的代谢影响不大,但过表达会造成毒力的下降,并使膜的通透性改变,影响物质的转运。
[Abstract]:Shigella spp.bacteria, commonly known as Shigella spp.., are a class of gram-negative bacilli that do not form spores and can cause typical dysentery symptoms characterized by fever, abdominal pain and diarrhoea by invading intestinal epithelial cells. According to WHO statistics, About 164.7 million people are infected with dysentery every year, 1.1 million people die, most of them are children under the age of five. Shigella flexneri is the main infection strain of Shigella flexneri in developing countries, serotype 2a is the main serotype. In our country, about 20 million people are infected with dysentery every year. Shigella flexneri 2a is responsible for 50-70% of the infected or endemic Shigella dysenteriae. Therefore, the basic research of Shigella is particularly important to the health and epidemic prevention work in China. Studies have shown that Shigella flexneri 2a exerts complete cell invasiveness at 37 鈩，

本文编号：1646373