人FcγRⅠ的原核表达、真核表达及线性结合表位的初步鉴定

发布时间：2018-04-15 19:16

  本文选题：人FcγRI + 线性表位　； 参考：《河南农业大学》2010年硕士论文

【摘要】： Fc受体(FcR)是特异亲和免疫球蛋白(Ig) Fc片段的细胞表面分子,在免疫辅助细胞和效应细胞均有表达,具有许多重要的生理功能,是细胞免疫与体液免疫的联系纽带,在机体免疫调节中起主要作用。抗体介导的炎性反应可通过抑制型和激活型FcR进行调节,因此FcR是治疗自身免疫性疾病和过敏理想的药物靶标。本研究利用化学合成多肽初步鉴定了人IgGFc受体(FcyR)的线性配体结合表位,是首次开展FcR线性配体结合表位的探索研究,对深入了解FcyR-IgG相互作用的分子基础有重要意义,为FcR靶标药物的分子设计提供新了的思路。 人FcyRI (CD64)为高亲和力受体,能高亲和力结合人IgG单体,胞外区含有3个Ig样结构域。本研究中将huFcyRI编码区cDNA亚克隆到表达载体pcDNA3中,受体分子在COS-7细胞表面表达,然后通过玫瑰花环试验测定huFcγRI的配体特异性,IgG-RBC在huFcγRI转染细胞上形成了明显的玫瑰花环。将huFcγRI胞外区cDNA亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌BL21中表达了huFcγRI胞外区,但未能成功从包涵体中复性huFcγRI重组蛋白。为了鉴定huFcγRI的线性配体结合表位,在EC2结构域设计合成huFcγRI多肽,Dot-blot结果显示huFcγRI的122-133位多肽CLYYRNGKAFKFF和144-153位多肽CTNISHNGTYH特异结合人IgG,位于受体EC2结构域C-C'环和E-F环。
[Abstract]:FC receptor FcR is the cell surface molecule of specific affinity immunoglobulin (IgG) FC fragment. It is expressed in immune helper cells and effector cells, and has many important physiological functions. It is the link between cellular immunity and humoral immunity.Play a major role in the immune regulation of the body.Antibody mediated inflammatory response can be regulated by inhibitory and activated FcR, so FcR is an ideal drug target for the treatment of autoimmune diseases and allergies.In this study, the linear ligand binding epitopes of human IgGFc receptor FcyR were preliminarily identified by using synthetic polypeptides. It is the first time to explore the ligand binding epitopes of FcR, which is of great significance for further understanding the molecular basis of FcyR-IgG interaction.It provides a new idea for the molecular design of FcR target drugs.Human FcyRI cd64) is a high affinity receptor, which can bind to human IgG monomer. The extracellular domain contains three Ig-like domains.In this study, the huFcyRI coding region cDNA was subcloned into the expression vector pcDNA3, and the receptor molecules were expressed on the surface of COS-7 cells. The ligand specific IgG-RBC of huFc 纬 RI was determined by rosette assay to form an obvious rosette on huFc 纬 RI transfected cells.The extracellular region of huFc 纬 RI was subcloned into prokaryotic expression vector pGEX-6P-1. The extracellular domain of huFc 纬 RI was expressed in Escherichia coli BL21, but the recombinant huFc 纬 RI protein was not successfully refolded from the inclusion body.In order to identify the linear ligand binding epitopes of huFc 纬 RI, huFc 纬 RI polypeptides CLYYRNGKAFKFF at position 122-133 and CTNISHNGTYH at position 144-153 on huFc 纬 RI were designed and synthesized in EC2 domain. They were located in C-C 'ring and E-F ring of receptor EC2 domain.
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392.1;Q78

【共引文献】

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本文编号：1755426