表皮干细胞的分离培养及蛋白组学研究

发布时间：2018-04-30 15:54

  本文选题：表皮干细胞 + 细胞培养　； 参考：《暨南大学》2008年硕士论文

【摘要】： 研究目的:完善表皮干细胞体外分离培养及鉴定的技术方法,建立皮肤角朊细胞与表皮干细胞总蛋白的双向电泳图谱,并初步分析二者表达蛋白质的差异,为进一步研究体外调控表皮干细胞的增殖分化提供线索。 研究方法:采用酶消化法获得单个表皮细胞悬液,Ⅳ型胶原快速贴壁法分选表皮干细胞,以复合DMEM为培养基培养,免疫组化法检测CK19和P63,流式细胞仪检测β1整合素,CD71和细胞周期来鉴定目的细胞,通过细胞生长曲线观察其增殖能力;利用双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)建立皮肤角朊细胞与表皮干细胞的双向电泳图谱,Image Master 2D Elite 5.0软件分析两种细胞的差异表达蛋白点。 结果:Ⅳ型胶原筛选细胞在复合DMEM培养基中生长良好,CK19和P63阳性表达,β1整合(CD29)表达率为98.57%,CD71表达率为9.05%,94.99%细胞处于增殖期,细胞呈现指数增长,以上表明分选细胞是表皮干细胞;两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,皮肤角朊细胞与表皮干细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为982±18和930±15,匹配点数为850±13和798±11,匹配率是86.56%和85.81%,两种细胞蛋白质间匹配点数是886±8,配率是76.98%。找到差异蛋白点11个,其中只在表皮干细胞中表达或高表达的有8个,只在皮肤角朊细胞中表达或高表达的有3个。 结论:本实验采用多种方法证实贴壁细胞为表皮干细胞,利用双向电泳法得到了分辨率较高且重复性好的皮肤角朊细胞与表皮干细胞蛋白质组图谱,二者存在一定的差异,这对获取组织工程皮肤的种子细胞及探索体外调控表皮干细胞的增殖分化机制具有重要意义。
[Abstract]:Objective: to improve the technique of isolation, culture and identification of epidermal stem cells in vitro, to establish a two-dimensional electrophoresis map of the total proteins of skin keratinocytes and epidermal stem cells, and to analyze the differences between the two proteins. It provides clues for further study on the regulation of proliferation and differentiation of epidermal stem cells in vitro. Methods: single epidermal cell suspension was obtained by enzyme digestion, epidermal stem cells were separated by type 鈪，

本文编号：1825183