丁香假单胞菌HrpA单克隆抗体的制备及scFv抗体库的构建

发布时间：2018-05-10 17:40

  本文选题：hrp基因 + HrpA蛋白　； 参考：《福建农林大学》2008年硕士论文

【摘要】： Hrp(hypersensitive response and pathogenicity,Hrp)基因广泛存在于植物病原细菌中,参与Hrp极毛系统的组装,不仅可运输效应蛋白至植物细胞,导致HR(过敏性反应)或抗病性,还可运输致病性和毒性蛋白或抑制子活性物质,引起植物病害。hrp基因多串联成簇且相当保守,在诱导培养基或植物体内,基因簇中的hrpA基因编码细菌表面附属物-Hrp极毛的结构蛋白HrpA。Hrp极毛在植物-病原细菌互作中扮演十分重要的角色。病原细菌能否使亲和性植物发病与其是否有Hrp极毛有直接的关系。 在对hrp基因进行深入研究的基础上,我们尝试设计新的化学药剂和抗体阻止HrpⅢ型分泌系统的组装或致病毒力蛋白因子的分泌运输,从而有效限制植物细菌病害的发展。本研究以丁香假单胞菌番茄变种DC3000(Pseudomonassyringae pv.tomato DC3000)hrp基因表达的工程蛋白HrpA/Ps作为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆杂交瘤细胞抗体,然后从杂交瘤细胞系中提取RNA,反转录合成cDNA,并以此为模板,PCR扩增获得全套抗体的可变区基因,利用从PQY1.5质粒扩增出一柔性肽段(Linker)连接成基因工程单链抗体(single chainvariable fragment,scFv),再通过基因工程方法,将scFv与噬菌粒pCANTAB-5E连接,转化大肠杆菌TG1菌株,获得单链抗体噬菌体文库,以便利用噬菌体展示技术对抗体库进行淘选,获得了HrpA特异性的单链抗体。 以单克隆抗体为来源的单链抗体,亲和力和特异性都较好,可以为进一步进行植物抗病基因工程和植物抗体研究提供基因来源。
[Abstract]:The Hrp(hypersensitive response and pathogenicity HRP gene is widely present in plant pathogenic bacteria and participates in the assembly of Hrp polar hair system, which can not only transport effector protein to plant cells, but also lead to HR-allergic reaction or disease resistance. It can also transport pathogenicity and toxic protein or suppressor active substances, causing plant disease hrp genes to cluster and quite conserved, in induction medium or plant body, The hrpA gene in the gene cluster encodes the structural protein HrpA.Hrp polar hair, a bacterial surface appendage, which plays a very important role in the plant-pathogenic bacteria interaction. Whether pathogenic bacteria can cause affinity plant disease is directly related to the presence of Hrp hair. Based on the in-depth study of hrp gene, we try to design new chemical agents and antibodies to prevent the assembly of Hrp 鈪，

本文编号：1870248