线粒体自噬受体Bnip3的载体构建及蛋白表达纯化

发布时间：2018-05-15 12:28

  本文选题：线粒体自噬受体Bnip + 载体构建　； 参考：《生物技术》2015年04期

【摘要】：[目的]获得可用于蛋白晶体筛选的高纯度Bnip3蛋白。[方法]将Bnip3截断基因构建到原核表达载体上并转化大肠杆菌。IPTG诱导表达后通过GST柱纯化目标蛋白。TEV酶切除GST标签后采用凝胶过滤层析纯化Bnip3蛋白。[结果]Bnip3截断基因重组体成功构建并诱导表达目标蛋白。通过GST亲和层析得到可溶性的携带GST标签的Bnip3(1~111)和Bnip3(1~152)蛋白。切除GST标签的Bnip3(1~152)通过凝胶过滤层析得到构象均一的二聚体蛋白。[结论]采用原核表达、亲和层析和凝胶过滤层析可获得构象均一的高纯度二聚体Bnip3蛋白。
[Abstract]:[objective] to obtain high purity Bnip3 protein for protein crystal screening. [methods] the Bnip3 truncated gene was constructed into the prokaryotic expression vector and transformed into E. coli. IPTG induced expression. The target protein was purified by GST column and the GST label was removed. The Bnip3 protein was purified by gel filtration chromatography. [results] the recombinant Bnip3 truncated gene was successfully constructed and induced to express the target protein. GST affinity chromatography was used to obtain soluble GST labeled Bnip3G (1 / 111) and Bnip3n (1 / 152) proteins. The conformational dimer protein was obtained by gel filtration chromatography. [conclusion] High purity Bnip3 protein with homogeneous conformation can be obtained by prokaryotic expression, affinity chromatography and gel filtration chromatography.
【作者单位】： 广东医学院附属医院妇产科;广东医学院附属医院儿科;
【基金】：广东省自然科学基金项目(No.S2013040012902) 国家自然科学青年基金项目(No.31300602)资助~~
【分类号】：R363;Q786

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 杨辉;左O;刘雯;;Parkin、PINK1、DJ-1和线粒体功能障碍与帕金森病[J];生命科学;2010年10期

2 谢洪;李艳君;陈英玉;;线粒体自噬[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年12期

【共引文献】

相关期刊论文 前7条

1 张星亮;谭建新;;β-Ogg1与H-Ras可溶性原核表达纯化及其相互作用的鉴定[J];广东医学院学报;2015年04期

2 熊英环;林千文;吴湘涛;张星亮;;线粒体自噬受体Nix蛋白的原核表达及其纯化[J];广东医学院学报;2015年04期

3 林剑霞;潘瑶;李妍;;帕金森病的研究进展[J];吉林医药学院学报;2015年02期

4 张淑香;田伟;任燕冬;李玉萍;刘树民;;帕金森病动物模型评价及发病机制探讨[J];中国临床保健杂志;2015年04期

5 许美芬;何轶群;管敏鑫;;线粒体融合、分裂与神经变性疾病[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年12期

6 董明;陈小婉;席克虎;王有虎;桂岩;张福宏;马春霞;洪浩;刘翔毅;江英;马毅;杨贵军;张小兵;;18β-甘草次酸对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞线粒体的影响[J];山东大学耳鼻喉眼学报;2014年03期

7 原阳;潘珊珊;;活性氧介导氧化应激在心血管应激及运动中对心肌线粒体和自噬作用的新进展[J];体育科学;2015年05期

相关会议论文 前1条

1 邓增钦;张星亮;张琦;刘扬;王峥;吴玮;龙加福;陈忠周;;脱落酸受体PYL3复合物结构和功能研究[A];中国晶体学会第五届全国会员代表大会暨学术大会（大分子分会场）论文摘要集[C];2012年

相关博士学位论文 前1条

1 李坤;拟南芥MKKK-MKK-MPK级联调控ABA抑制主根生长过程机制分析[D];河南大学;2014年

相关硕士学位论文 前7条

1 熊s，

本文编号：1892463