结核分枝杆菌MPT83的免疫原性及其奶牛结核病血清学检测方法的建立

发布时间：2018-05-24 00:51

  本文选题：牛结核病 + MPT蛋白　； 参考：《微生物学报》2015年02期

【摘要】：【目的】利用大肠杆菌系统表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白,通过小鼠模型评价其免疫原性,建立血清学间接ELISA方法用于牛结核病临床检测,评价其应用潜能。【方法】构建p ET30a(+)-mpt83重组质粒,转化BL21(DE3)诱导表达并纯化,经细胞表面分子的流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)分析、ELISPOT试验等分析其在小鼠中的免疫原性,建立间接ELISA方法,检测临床奶牛血样,评价其用于牛结核病血清学检测的潜能。【结果】SDS-PAGE显示目的蛋白成功表达,Western blot证实其对兔抗H37Rv多抗血清具有良好免疫反应性;FCM结果显示其下调树突状细胞表面CD80分子的表达,上调小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞表面CD69的表达,ELISPOT结果表明其诱导的特异性IL-4分泌细胞数显著高于IFN-γ分泌细胞数,表现为Th2型免疫应答;建立了ELISA方法,检测临床奶牛血样200份,与牛结核外周血γ-干扰素体外释放试验结果的阳性符合率和阴性符合率分别为48.6%和90%。【结论】在大肠杆菌系统中高效可溶性表达MPT83蛋白,其在小鼠模型中主要呈现Th2型免疫应答,并以该蛋白为抗原建立了牛结核病血清学检测的间接ELISA方法。
[Abstract]:[objective] to express and purify Mycobacterium tuberculosis MPT83 protein by Escherichia coli system, evaluate its immunogenicity by mouse model, and establish a serological indirect ELISA method for clinical detection of bovine tuberculosis. [methods] the recombinant plasmid pET30a (pET30a) was constructed and transformed into BL21DE3 to induce its expression and purification. The immunogenicity of pET30a in mice was analyzed by flow Cytometry FCM and indirect ELISA method was established. Blood samples of clinical cows were detected. [results] SDS-PAGE showed that the target protein was expressed successfully. Western blot confirmed that it had a good immunoreactivity to rabbit anti-H37Rv polyantibody serum. The results showed that it down-regulated the expression of CD80 molecule on dendritic cell surface. The expression of CD69 on the surface of CD4 and CD8 T cells in the spleen of mice was up-regulated. The results showed that the number of specific IL-4 secreting cells induced by Elispot was significantly higher than that of IFN- 纬 secreting cells, which was characterized by Th2 type immune response. The positive coincidence rate and negative coincidence rate of IFN- 纬 release from bovine tuberculosis peripheral blood in vitro were 48.6% and 90.1%, respectively. [conclusion] MPT83 protein was highly expressed in Escherichia coli system. The Th2 type immune response was mainly present in the mouse model, and the indirect ELISA method for the detection of bovine tuberculosis serology was established with this protein as antigen.
【作者单位】： 扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;无锡市动物疫病预防控制中心;
【基金】：国家“973项目”(2012CB518805) 国家星火计划项目(2014GA690017) 扬州市自然科学基金项目(YZ2014027) 江苏高校优势学科建设工程资助项目~~
【分类号】：R392

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 孟闯;万婷;徐正中;单法;解晓莉;申峻松;范峰;陈祥;焦新安;;结核分枝杆菌ESAT6-CFP10蛋白的融合表达及其细胞免疫学特性[J];畜牧兽医学报;2014年05期

【共引文献】

相关期刊论文 前6条

1 时振华;孟闯;徐正中;万婷;单法;陈祥;焦新安;;结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的真核表达及其牛结核病诊断价值评价[J];农业生物技术学报;2015年02期

2 王华;孙成友;王淑娟;吴晓东;徐天刚;王志亮;;牛结核病的传播特点和风险因素及防控[J];现代生物医学进展;2013年23期

3 贾红;鑫婷;郭晓宇;袁维峰;侯绍华;朱鸿飞;;牛结核病对人类健康的影响及其诊断方法[J];微生物与感染;2014年01期

4 柏亚铎;赖平安;史喜菊;高云航;张伟;汪琳;王滨;邓永强;严安;;牛分枝杆菌CFP-10和ESAT-6基因的融合表达及其抗原活性鉴定[J];中国兽医学报;2014年09期

5 谭伟;谢志勤;谢芝勋;;牛结核病疫苗研究概述[J];中国奶牛;2014年15期

6 游晓拢;曾焱华;;结核分枝杆菌免疫优势抗原研究进展[J];微生物学免疫学进展;2014年06期

相关博士学位论文 前5条

1 葛淑敏;非结核分枝杆菌的鉴定及胞内分枝杆菌HBHA表达和实验免疫研究[D];吉林农业大学;2013年

2 鑫婷;重组牛分枝杆菌特异性蛋白在牛结核病诊断中的初步应用研究[D];中国农业科学院;2013年

3 苏峰;HBD3抗结核能力鉴定及抗结核转基因牛生产[D];西北农林科技大学;2013年

4 康静静;牛中性粒细胞β-防御素4和5成熟肽的毕赤酵母表达及其抗分枝杆菌活性研究[D];中国农业大学;2014年

5 杨杨;AIM2炎症复合体在牛分枝杆菌介导的IL-1β的分泌和细胞凋亡中的作用机制研究[D];中国农业大学;2014年

相关硕士学位论文 前2条

1 邴睿;我国牛结核病血清学筛查及其病原的分离鉴定[D];甘肃农业大学;2013年

2 万婷;牛结核外周血IFN-γ体外释放试验刺激原的筛选与鉴定[D];扬州大学;2014年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 张辉,潘志明,焦新安;一种细胞因子检测新方法——ELISPOT技术[J];动物医学进展;2004年06期

2 申峻松;张辉;张成全;潘志明;殷月兰;焦新安;;结核分枝杆菌CFP-10单克隆抗体的研制与初步鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年12期

3 陈祥;刘静;苗晓青;王晓泉;高崧;焦新安;刘秀梵;;禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测[J];畜牧兽医学报;2007年05期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王忠仁;牛结核病与人结核病的相互关系[J];中国防痨杂志;2005年02期

2 亓文宝;罗满林;周荣;白培胜;贺东生;刘镇明;黄毓茂;;牛结核病荧光定量PCR快速检测方法的建立及初步应用[J];中国人兽共患病学报;2007年09期

3 兰德松;;牛结核病及其风险分析[J];中国人兽共患病学报;2011年09期

4 王华;孙成友;王淑娟;吴晓东;徐天刚;王志亮;;牛结核病的传播特点和风险因素及防控[J];现代生物医学进展;2013年23期

5 杨卫冲,焦新安;牛结核病诊断技术的研究进展[J];中国人兽共患病杂志;2004年12期

6 严懿嘉;朱建国;华修国;;基因分型技术在牛结核病的分子流行病学研究中的应用[J];中国人兽共患病学报;2006年04期

7 贾红;鑫婷;郭晓宇;袁维峰;侯绍华;朱鸿飞;;牛结核病对人类健康的影响及其诊断方法[J];微生物与感染;2014年01期

8 杨醉宇;刘文杰;郭社旺;丛春英;;人牛结核病互感关系的探讨[J];畜牧兽医科技信息;2009年06期

9 姜秀云,何昭阳;活体电穿孔法导入DNA:牛结核病免疫接种新技术[J];中国人兽共患病杂志;2005年02期

10 宫强;刘思国;;牛结核病DNA疫苗研究现状[J];中国人兽共患病学报;2009年02期

相关会议论文 前10条

1 陈焕春;郭爱珍;;国内外牛结核病的防控历史与现状[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（上册）[C];2009年

2 王孟华;;牛结核病检测及存在问题探讨[A];福建省科协第二届学术年会卫星会议动物传染病防制与人类健康研讨会论文集[C];2002年

3 刘思国;王春来;郭设平;张秀华;郭洋;邵美丽;宫强;;牛结核病病原生态学和流行病学研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

4 王孟华;;牛结核病检测及存在问题探讨[A];福建省科协第二届学术年会卫星会议——动物传染病防治与人类健康研讨会论文集[C];2002年

5 林世禄;;乳牛结核病的防治措施[A];福建省科协第七届学术年会分会场——“坚持科技创新，建设海西现代畜牧业”研讨会论文集[C];2007年

6 赵德明;;牛结核病研究进展[A];第3届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2011年

7 刘思国;王春来;郭设平;宫强;邵美丽;;牛结核病的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年

8 徐凤宇;高云航;何昭阳;;ELISA检测乳中牛结核抗体的研究[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

9 刘思国;宫强;王牟平;王春来;彭永刚;;牛结核病[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

10 刘思国;王春来;郭设平;宫强;邵美丽;;牛结核病的研究进展[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（下）[C];2005年

相关重要报纸文章 前5条

1 王忠仁;控制人类结核 必先扑灭牛结核[N];健康报;2004年

2 中国动物疫病预防控制中心;怎样防控牛结核病[N];农民日报;2007年

3 乔志;牛结核病的防治[N];农民日报;2005年

4 朱建国;必须高度重视我国动物结核病防制[N];中国畜牧兽医报;2005年

5 远征公司开发部经理 岳永波;奶牛常见疾病及其防治[N];中国畜牧报;2004年

相关博士学位论文 前2条

1 徐贤坤;水牛γ-干扰素单克隆抗体制备及水牛结核病夹心ELISA检测方法的初步建立[D];四川农业大学;2009年

2 宫强;牛结核病DNA疫苗的研究[D];中国农业科学院;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 杜艳芬;牛结核病病原学调查及分子流行病学研究[D];中国农业科学院;2009年

2 陈江;牛结核病γ-干扰素诊断方法的优化与应用[D];湖南农业大学;2009年

3 钦博;牛结核病胶乳凝集方法的建立以及临床的初步应用[D];华中农业大学;2006年

4 张桂荣;牛结核病特异抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用[D];华中农业大学;2006年

5 张书环;牛结核病胶体金免疫层析方法的建立与初步运用[D];华中农业大学;2007年

6 李树春;牛结核病流行病学调查和诊断[D];新疆农业大学;2010年

7 徐凤宇;ELISA检测乳中结核抗体的研究[D];吉林农业大学;2002年

8 邴睿;我国牛结核病血清学筛查及其病原的分离鉴定[D];甘肃农业大学;2013年

9 晁彦杰;牛结核流行病学和树突状细胞感染毒力M.bovis的基因表达[D];华中农业大学;2008年

10 李舵;新疆部分地区牛结核病监测与防治策略研究[D];西北农林科技大学;2005年

，

本文编号：1927052