重庆市家畜大肠杆菌O157致病性及外膜蛋白的初步研究

发布时间：2018-07-16 07:44

【摘要】： 肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7(Entero-hemorrhagic E.Coli,EHEC O157:H7)引起的感染性腹泻是近年来危害极其严重的肠道传染病。它除引起感染性腹泻、出血性肠炎(HC)外,还可引发溶血性尿毒综合征(HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)等并发症。自该菌被分离鉴定以来,已在国内外引起多次爆发与流行。直至2006和2007年,美国和日本仍有该菌引起人HUS甚至死亡的报道。大肠杆菌O157也大面积存在于我国,且呈多因素感染之势。我国已将EHEC列为21世纪可能对国人卫生健康有重大影响的12种病原微生物之一。因此进一步加强EHEC O157:H7的诊、防、治研究已迫在眉睫。由于O157的爆发流行以及在治疗上的无奈,疫苗研究就显得尤其紧迫。外膜蛋白(Omp)是大肠杆菌的一个重要毒力因子,其涉及大肠杆菌病的致病机理及免疫机理,这预示着Omp对大肠杆菌病的防治有广阔的应用前景。本试验对重庆地区家畜大肠杆菌O157的致病性、遗传相关性、Omp进行初步研究,旨在为该菌诊、防、治研究提供重要的科学依据。 1.大肠杆菌O157的致病性分析目的了解和比较重庆市家畜大肠杆菌O157分离株间的致病性。方法从重庆市6个地区的养殖场分离到的11株大肠杆菌O157对小白鼠进行感染试验,取小鼠肝、脾、肾、肠等病变组织制备病理切片,光镜观察切片。结果11株O157分离株均能感染致死小鼠,引起小鼠肠壁变薄充血,肠粘膜坏死脱落,肝肾淤血变性坏死,脾出血,肺淤血等组织病变。结论重庆市大肠杆菌O157分离株均具有损害小鼠各脏器并感染致死的能力,且各菌株引起小鼠病变较为一致,病变程度有一定的差异。 2.大肠杆菌O157毒力基因stx2/stx2c的检测目的了解O157分离株是否携带stx2及stx2c亚基因。方法用PCR技术扩增stx2/stx2c基因B亚基的保守序列,克隆至pMD18-T载体进行测序和序列比较分析。结果除了分离自荣昌/永川的RY8菌株,其他菌株未扩增出stx2/stx2c B亚基。该序列与stx2,stx2c,stx2d,stx2e,stx2fB亚基同源性分别为99.3%、94.8%、86.3%、84.5%、80%。结论首次检测出重庆市有携带高致病性stx2基因的O157菌株存在,故应加强本地大肠杆菌O157检测工作,防患于未然。 3.大肠杆菌O157外膜蛋白的SDS-PAGE分析目的了解O157分离株遗传相关性及主要Omp的免疫原性。方法采用超声波破碎、N-十二烷基肌氨酸处理和超速离心技术提取主要Omp,用Omp分型法对分离株Omp进行分型;提取的Omp免疫家兔自制抗血清,用免疫印记试验(western blot)分析菌株Omp的免疫原性。结果SDS-PAGE结果将分离株分为3个Omp型:YB2菌株为Omp-A型:YB1、YB3、YB4、YB5、YB6、YB8、YB9、YB10、YB11菌株为Omp-B型;YY7菌株为Omp-C型。3种Omp型代表株主要Omp均能产生与之结合的抗体,且Sakai标准株与分离株间存在共同抗原片段。结论重庆市家畜大肠杆菌O157菌株遗传性较为单一,但也出现极小程度的遗传分化。菌株主要Omp具免疫原性,且Sakai标准株与分离株存在共同的具有免疫原性的蛋白质片段。
[Abstract]:EHEC 157 : H7 ( Entero - hemorrhagic E . Coli , EHEC 157 : H7 ) caused by enterohemorrhagic Escherichia coli is an extremely serious intestinal infectious disease in recent years .

1 . Pathogenic analysis of Escherichia coli 0157

Objective To understand and compare the pathogenicity of 11 strains of E . coli 0157 isolated from livestock farms in 6 districts of Chongqing .

2 . Detection of the virulence gene stx2 / stx2c of Escherichia coli 0157

The stx2 / stx2c B subunit was amplified by PCR . The homology of stx2 , stx2c , stx2d , stx2e and stx2Bsubunits was 99 . 3 % , 94 . 8 % , 86 . 3 % , 84 . 5 % and 80 % respectively .

3 . SDS - PAGE analysis of outer membrane protein of Escherichia coli 0157

Objective To study the genetic correlation of Omp and the immunogenicity of Omp in isolated strains . The results showed that the isolates were Omp - A : YB1 , YB3 , YB4 , YB5 , YB6 , YB8 , YB4, YB5 , YB6 , YB8 , YB8 , YB, YB11 were Omp - C type .
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R378.11

【引证文献】