大鼠EPO真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

发布时间：2018-07-16 17:04

【摘要】：目的构建表达大鼠促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的真核表达质粒pEGFP-N1/EPO,并检测其在体外的表达。方法从大鼠肾脏获得EPO基因片段并用RT-PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pEGFP-N1,测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),采用免疫组化和RT-PCR检测EPO的表达。结果经酶切和测序鉴定证实本实验构建的重组表达质粒正确,该质粒在体外转染大鼠MSCs细胞后可表达EPO蛋白。结论成功构建的pEGFP-N1/EPO重组质粒能在体外表达EPO蛋白。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression plasmid pEGFP-N 1 / EPO expressing rat erythropoietin (EPO) and detect its expression in vitro. Methods EPO gene fragment was amplified from rat kidney by RT-PCR and ligated into eukaryotic expression plasmid pEGFP-N1.After sequencing, (mesenchymal stem cells were transfected into rat bone marrow mesenchymal stem cells by liposome. The expression of EPO was detected by immunohistochemistry and RT-PCR. Results the recombinant expression plasmid was confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. The recombinant plasmid could express EPO protein after transfection into MSCs cells in vitro. Conclusion the recombinant plasmid pEGFP-N _ 1 / EPO can express EPO protein in vitro.
【作者单位】： 第三军医大学新桥医院儿科;
【基金】：重庆市科委项目(2007BB5057) 重庆市计生委项目(2009C175)~~
【分类号】：R341

【参考文献】

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【共引文献】

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