肠杆菌科细菌碳青霉烯酶编码基因KPC-2传播机制研究

发布时间：2018-08-07 13:36

【摘要】： 目的： 研究华东地区6个城市8家医院的39株携带KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌耐药特征、分子流行病学和耐药基因周围环境。 材料与方法： 收集我国6个城市8家医院住院病人2006年3月到2007年12月携带KPC基因的肠杆菌科细菌共39株。采用Etest法测定其对十种常用抗菌药物的最小抑菌浓度值,采用PCR扩增和测序检测碳青霉烯酶基因,利用脉冲场凝胶电泳技术对菌株间的同源性进行分析,通过接合实验、质粒提取、Southern杂交等方法证明耐药基因位于质粒上,构建质粒DNA文库、鸟枪法测序测定耐药质粒的基因序列并通过生物信息学方法分析基因结构。 结果： 所有菌株对碳青霉烯类抗生素均表现出耐药或者敏感性降低,脉冲场凝胶电泳将36株肺炎克雷伯菌分为了6个主要的克隆型,所有菌株携带的KPC-2基因均位于耐药性质粒上,质粒的大小在40kb到180kb之间不等,部分质粒可以通过接合作用转移。并对其中一株肺炎克雷伯菌所携带的质粒pKP048进行了详细的基因序列测定,获得了KPC-2基因周围总长20.2kb的序列。 结论： 携带KPC-2基因耐药菌株已经在国内多家医院流行,该基因位于一个由Tn3转座子和Tn4401转座子共同整合而成的复杂结构上,这种由2个转座子整合而成的复杂转移单元很好地揭示了国内KPC-2基因的传播途径以及遗传背景。
[Abstract]:Objective: to study the drug resistance characteristics, molecular epidemiology and the surrounding environment of 39 strains of Enterobacteriaceae (Enterobacteriaceae) carrying KPC-2 type carbapenase in 8 hospitals in 6 cities of East China. Materials and methods: 39 enterobacteriaceae strains carrying KPC gene were collected from 8 hospitals in 6 cities of China from March 2006 to December 2007. Etest method was used to determine the minimum inhibitory concentration of 10 common antimicrobial agents, PCR amplification and sequencing were used to detect the carbapenem gene, and the homology among strains was analyzed by pulsed field gel electrophoresis (PGE). The plasmid DNA library was constructed by Southern blotting. The gene sequence of the plasmid was sequenced by bird gun method and the gene structure was analyzed by bioinformatics. Results: all strains showed resistance to carbapenem antibiotics or decreased sensitivity. 36 strains of Klebsiella pneumoniae were divided into 6 major clone types by pulsed field gel electrophoresis. All the KPC-2 genes carried by all strains were located on the resistant plasmids, the size of the plasmids ranged from 40kb to 180kb, and some of the plasmids could be transferred by conjugation. The plasmid pKP048 carried by one strain of Klebsiella pneumoniae was sequenced in detail, and the total length 20.2kb of KPC-2 gene was obtained. Conclusion: the drug-resistant strain carrying KPC-2 gene has been prevalent in many hospitals in China. The gene is located in a complex structure formed by the integration of Tn3 transposon and Tn4401 transposon. This complex transfer unit composed of two transposons well revealed the transmission pathway and genetic background of KPC-2 gene in China.
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R378

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本文编号：2170182