经口感染弓形虫小鼠小肠IgA分泌细胞及抗体水平动态变化

发布时间：2018-08-18 10:07

【摘要】： 目的观察经口感染弓形虫速殖子在小鼠小肠组织、实质器官内的动态分布,探讨弓形虫病的机制;动态观察弓形虫速殖子经口感染小鼠诱导IgA分泌细胞及抗体应答,分析两者的相关性,探讨IgA分泌细胞在抗弓形虫感染的黏膜免疫应答中的可能作用;观察STAg鼻内免疫小鼠诱导的小肠抗体分泌细胞及抗体水平动态变化,探讨STAg鼻内免疫对小鼠小肠黏膜不同部位IgA分泌细胞在抗弓形虫感染的黏膜免疫反应过程中的作用。 方法BALB/c小鼠96只,随机选取12只用0.5 ml/只PBS灌胃(对照组),其余小鼠用RH株弓形虫速殖子1×10~4个灌胃感染,分别于感染后2 d、4 d、6 d、8 d、10 d、12 d、14 d随机处死12只,取十二指肠、空肠、回肠、肝脏、脾、肾、肺、心和脑做组织印片,吉-瑞氏染色,镜检;免疫组化检测十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA分泌细胞数量变化,ELISA法测定小肠液IgA及血清IgG、IgA水平。 5～6周龄BABL/c小鼠96只,随机分为免疫组和对照组。免疫组用弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)20μg/只滴鼻免疫2次,间隔2周;对照组用20μl PBS代替。末次免疫后1周,灌胃攻击感染弓形虫速殖子1×10~4个/只。观察小鼠发病情况,于感染后6 d、7 d、8 d、9 d、10 d和11 d,分别颈椎脱臼处死免疫组和对照组小鼠各8只。免疫组化检测小肠不同部位黏膜中IgA分泌细胞;ELISA法测定血清IgG、IgA及肠液IgA水平。 结果感染后2 d在十二指肠、空肠、回肠、肺和心,4 d在脾,6 d在肾和肝脏发现虫体,脑内未发现虫体。十二指肠、空肠、回肠组织内虫体数量呈上升趋势,第6 d达高峰后稍有下降。肝内虫体数量呈上升趋势,第6 d最多;脾内虫体数量在6 d达峰值后保持较高水平;实验期间肾、肺和心内虫体数量保持较低水平阶段。 小肠IgA分泌细胞分布于小肠黏膜的固有层中,不同肠段IgA分泌细胞数量的变化规律各异。十二指肠黏膜IgA分泌细胞数量随感染后时间的推移,呈上升趋势。空肠黏膜的IgA分泌细胞数量在感染后2～8 d升高,随后下降,至14 d下降到感染前水平。回肠黏膜IgA分泌细胞数量在感染后2～6 d升高,随后下降,至12 d下降到低于感染前水平。感染后,小肠液IgA水平持续增高,血清IgA无变化IgG呈增高趋势。十二指肠、空肠和回肠黏膜的IgA分泌细胞数量与小肠液IgA的相关性分别为r=0.732(P＜0.001)、r=0.116(P=0.455)和r=-0.429(P＜0.005)。 STAg鼻内免疫小鼠后小肠IgA分泌细胞量变化规律为:在十二指肠黏膜内随感染天数增加逐渐增高;在空肠和回肠黏膜内随感染天数增加先上升后下降,对照组回肠黏膜内11 d低于6 d,其它11 d都高于6 d;免疫组始终高于对照组,但无统计学差异。小肠冲洗液IgA在第7 d降低,之后免疫组缓缓上升,对照组趋于平稳;血清IgA先下降后上升之后又下降;血清IgG趋势稳定;免疫组始终高于对照组,各项指标组内比较均无统计学差异,组间比较差异显著(P＜0.05)。 结论弓形虫经口感染小鼠后2 d,小肠组织出现大量速殖子;同时肺和心内有少量速殖子;4 d在脾、6 d在肾和肝脏发现虫体;速殖子在上述组织内增殖,并形成假包囊,脑内未发现虫体。 弓形虫经口感染小鼠可诱导十二指肠IgA分泌细胞高水平表达和小肠液中的IgA水平增高,两者呈正相关。小肠液中高水平的IgA主要由十二指肠黏膜的IgA分泌细胞分泌。 STAg鼻内免疫小鼠可诱导十二指肠黏膜固有层IgA分泌细胞高表达,小肠液和血清IgA水平升高,提示STAg在抗弓形虫感染中发挥作用。
[Abstract]:Objective To observe the dynamic distribution of Toxoplasma gondii tachyzoites in intestinal tissues and parenchymal organs of mice infected by oral infection and explore the mechanism of Toxoplasma gondii infection. To observe the dynamic changes of antibody secreting cells and antibody levels induced by STAg intranasal immunization in mice, and to explore the role of STAg intranasal immunization in the mucosal immune response to Toxoplasma gondii infection.
Methods 96 BALB/c mice were randomly selected and 12 mice were given 0.5 ml/PBS (control group). The remaining mice were given RH strain of Toxoplasma gondii tachyzoites 1 *10~4. Twelve mice were sacrificed at random 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 14 days after infection. Duodenum, jejunum, ileum, liver, spleen, kidney, lung, heart and brain were taken for tissue imprinting, Gi-Rayleigh staining and microscopic examination. The number of IgA secreting cells in duodenum, jejunum and ileum was detected by immunohistochemistry, and the levels of IgA in intestinal fluid and serum IgG and IgA were determined by ELISA.
96 BABL/c mice aged 5-6 weeks were randomly divided into immunization group and control group.The immunization group was immunized with 20 UG of STAg by nasal drip twice at intervals of 2 weeks.The control group was immunized with 20 UG of PBS instead.One week after the last immunization,the mice were attacked by gastric lavage with 1 6550 On the 9th, 10th and 11th day, 8 mice in the immune group and 8 mice in the control group were sacrificed respectively after cervical dislocation.
Results Insects were found in the duodenum, jejunum, ileum, lung and heart 2 days after infection, 4 days in the spleen, 6 days in the kidney and liver, but not in the brain. Maintain a high level; during the experiment, the number of kidney, lung and heart worms remained at a low level.
The number of IgA secreting cells in the duodenal mucosa increased with the passage of time after infection. The number of IgA secreting cells in the jejunal mucosa increased 2-8 days after infection, and then decreased to the pre-infection water 14 days after infection. The number of IgA secreting cells in the ileal mucosa increased from 2 to 6 days after infection, then decreased to below the pre-infection level at 12 days after infection. After infection, the IgA level in the small intestinal fluid continued to increase, while the serum IgA remained unchanged. The correlation between the number of IgA secreting cells in the duodenum, jejunum and ileum and the IgA level in the small intestinal fluid was r=0.732 (P<0.732). .001), r=0.116 (P=0.455) and r=-0.429 (P < 0.005).
The changes of intestinal IgA secretory cells in STAg intranasal immunized mice were as follows: in duodenal mucosa, IgA secretory cells increased gradually with the days of infection; in jejunum and ileum mucosa, IgA secretory cells increased first and then decreased with the days of infection; in the control group, IgA secretory cells in ileum mucosa for 11 days were lower than 6 days; in the other 11 days, IgA secretory cells in the immunized group were higher than those in the control group, but there was no statistical significance. The IgA of the small intestine flushing fluid decreased on the 7th day, then increased slowly in the immune group, and then stabilized in the control group. The serum IgA decreased first, then increased and then decreased; the trend of serum IgG was stable; the immune group was always higher than the control group, and there was no significant difference in the indexes between the two groups (P < 0.05).
Conclusion A large number of tachyzoites appeared in the small intestine 2 days after oral infection of Toxoplasma gondii, and a small number of tachyzoites were found in the lungs and hearts; worms were found in the spleen 4 days after infection and in the kidney and liver 6 days after infection; tachyzoites proliferated in the above tissues and formed pseudocysts, but no worms were found in the brain.
Toxoplasma gondii oral infection can induce the high level expression of IgA secreting cells in duodenum and the high level of IgA secreting cells in intestinal fluid.
STAg intranasal immunization could induce high expression of IgA secreting cells in the lamina propria of duodenum, and elevate the levels of IgA in intestinal fluid and serum, suggesting that STAg might play a role in the anti-Toxoplasma gondii infection.
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

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本文编号：2189141