日本血吸虫不同虫期蛋白组分的抗原特性研究

发布时间：2018-09-18 15:44

【摘要】： 目的研究日本血吸虫(Schistosoma japonicum)不同期虫体经化学裂解所获得的蛋白组分及其抗原特性,为筛选出对于血吸虫病的流行病学调查研究、预防及诊治具有应用价值的抗原分子提供理论依据。探寻酶消化法收集纯化虫卵的适宜条件,使所获虫卵纯度高,结构相对完整,以便于进一步对其进行生物学特性的研究。 方法以低温(4℃)处理雌雄虫减弱其动力方法分离雌、雄虫,以反复冻融(-30℃)方法处理雌虫尽可能除去其体内的虫卵,用化学裂解的方法制备日本血吸虫尾蚴、成虫(雌虫和雄虫)以及虫卵中的可溶性蛋白抗原,用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对不同期虫体蛋白组分的相对分子量大小及分布范围进行分析;以感染后不同时间的兔血清和免疫印迹试验(Western blotting)方法,对不同期虫体蛋白组分的抗原特性进行免疫分析;利用反复过筛结合胰酶消化后离心沉淀纯化收集血吸虫卵,并和漂浮法纯化虫卵进行比较分析。结果(1)日本血吸虫的不同虫期蛋白组分:虫卵52条带,其涉及的分子量范围极广,主要在61.0kD～97kD、19.0kD～35.1kD两大区间,尤其在19.0kD～35.1kD区间处的蛋白分子含量极为丰富;其次是雄虫48条带,其分子量分布范围主要为84.2kD～97.2kD、61.0kD～76.8kD、48.4kD～55.6kD、27.8kD～35.1kD;雌虫40条带,其分子量主要分布范围分别为25.6kD～27.6kD、27.8k D～35.1kD、61.0kD～67.2kD,而尾蚴蛋白组分最少(约6条)其相对分子量分别为146kD、121kD、78.1kD、66.8kD、55.6kD、36.6kD。 (2)可溶性尾蚴抗原(SCA)中78.1kD分子在与感染后6周兔血清免疫反应最强;雄虫可溶性抗原(AWA-m)中的58.5kD、55.8kD、33.6～39.8kD分子与感染兔血清随时间延长印迹反应增强;雌虫可溶性抗原(AWA-f)中的55.8kD和26.1～33.3kD分子印迹反应也是逐步增强;虫卵SEA出现的免疫反应的分子为109.5kD、105.0kD、78.1～88.7kD、68.9kD、36.6kD、27.3kD ,量多且逐步增强。 (3)酶消化法在适宜条件(37℃、0.25%胰酶、适当振摇)下,所收集纯化的虫卵结构完整,得率高,纯度可达99%以上。 结论血吸虫虫体用化学裂解所获得的可溶性蛋白经SDS-PAGE显示:不同虫期、不同性别的虫体,其蛋白组分具有差异性;免疫印迹结果表明:日本血吸虫的SCA中78.1kD分子,AWA中的58.5kD、55.8kD、26.1～33.3kD、33.6～39.8kD分子,SEA中的相对分子量为109.5kD、105.0kD、78.1～88.7kD、68.9kD、36.6kD、27.3kD可能具有潜在的用于诊断和防治血吸虫病的价值;酶消化法与漂浮法收集纯化的血吸虫卵的比较结果提示:酶消化法纯化血吸虫卵效果理想,更利于人们对血吸虫卵的特性进行深入研究。
[Abstract]:Objective to study the protein components and antigens obtained from the chemical cleavage of Schistosoma japonicum (Schistosoma japonicum) at different stages in order to screen out the epidemiological investigation of schistosomiasis. Prevention, diagnosis and treatment of antigenic molecules of practical value to provide theoretical basis. To explore the suitable conditions for the collection and purification of eggs by enzyme digestion, the obtained eggs are of high purity and relatively complete structure, so as to further study the biological characteristics of the eggs. Methods female and male females were separated by low temperature (4 鈩，

本文编号：2248368