雌二醇对人幼稚型精原干细胞增殖活性影响机制的初步探讨

发布时间：2018-11-09 20:54

【摘要】： 目的与意义:幼稚型精原干细胞是一种同时具有能够分化成为精子,或转化成为具有多能干细胞能力的一种特殊的干细胞,其在体内体外发生和凋亡的调节机制至今仍鲜有研究报道。在体内发育过程中,睾丸支持细胞(Sertoli cell)是唯一在发育全过程与精原干细胞接触的细胞,并以其独特的结构和功能为精子发生提供适宜的微环境,其中Sertoli细胞分泌的SCF是调节精原干细胞增殖、抗凋亡的关键因子,而Sertoli细胞对精原干细胞的调节作用受到激素、细胞因子等许多复杂因素的影响。本研究拟将人胚胎Sertoli细胞作为研究主体,建立体外分离、纯化和培养人胚胎Sertoli细胞的体系;在此基础上,观察不同浓度和不同作用时间雌二醇(β-estradiol)对人胚胎Sertoli细胞分泌干细胞因子(SCF)功能的调节;同时,研究雌二醇作用于人胚胎Sertoli细胞与幼稚型精原干细胞共培养体系,从细胞和分子水平观察雌二醇通过人胚胎Sertoli细胞对人幼稚型精原干细胞体外培养的调节。 材料与方法: 第一部分建立体外培养人胚胎Sertoli细胞体系:分离人胚胎Sertoli细胞,采用两步酶消化法及自然去除生殖细胞的纯化方法,对人胚胎Sertoli细胞进行接种与培养传代至12代,并对传代培养的纯化Sertoli细胞进行形态学,细胞标记物及功能检测,以证实培养细胞为具有生物学功能的Sertoli细胞; 第二部分检测雌二醇对人胚胎Sertoli细胞体外表达SCF的调节:通过RT-PCR及细胞免疫荧光染色对人胚胎Sertoli细胞进行雌激素受体(ER)检测,并采用Realtime-PCR检测在不同浓度雌二醇及其不同作用时间,对人胚胎Sertoli细胞SCF基因表达的调节,并用细胞免疫荧光检测雌二醇调节人胚胎Sertoli细胞SCF蛋白表达的能力; 第三部分雌二醇对人幼稚型精原干细胞体外扩增的调节:在人胚胎Sertoli细胞与人幼稚型精原干细胞体外共培养体系中,对培养所得细胞进行生殖细胞标记物和多能性标记物检测,通过5-溴,2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)整合实验,检测雌二醇在共培养体系中对人幼稚型精原干细胞体外增殖的调节,用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对雌二醇在人幼稚型精原干细胞凋亡过程中的作用进行初步研究。 结果:首先,检测体外培养的人胚胎Sertoli细胞的分子标记为MIS+/c-Kit-/AP-,证明为纯化的人胚胎Sertoli细胞;实验结果显示,浓度为100ng/ml的雌二醇对人胚胎Sertoli细胞的SCF产生有显著促进作用,且这种作用在15min起效,在1h达到高峰并继续维持。雌二醇也能促进SCF蛋白表达增高。体外建立人胚胎Sertoli细胞与人幼稚型精原干细胞共培养体系,培养所得精原干细胞经标记物检测为c-Kit+/SSEA-4+/Oct-4+,证实其为具有多能性的幼稚型精原干细胞。在培养基中添加适宜浓度的雌二醇能诱导人胚胎Sertoli细胞产生SCF,与未添加雌二醇组比较,添加雌二醇组幼稚型精原干细胞BrdU整合阳性率显著提高,证实雌二醇对间接提高幼稚型精原干细胞增殖能力有显著促进作用;而且添加雌二醇组与未添加组及雌二醇与ER拮抗剂(ICI 182780)共同添加组比较,TUNEL整合率显著下降,提示雌二醇能间接抑制幼稚型精原干细胞凋亡。 结论:本课题在细胞和分子水平上探讨了雌二醇对人幼稚型精原干细胞增殖活性的影响机制。结果表明,本研究建立了稳定的体外纯化,培养及传代人胚胎Sertoli细胞的体系;首次证实雌二醇能促进人胚胎Sertoli细胞表达SCF,具有剂量及时间依赖性;从细胞水平初步阐明了雌二醇通过调节SCF的产生间接调节人幼稚型精原干细胞增殖及凋亡的机制。也为进一步探讨人精原干细胞在体内的发育过程及增殖调控因素奠定了基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R321

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 邓争荣;李尚俭;朱宏海;王军奎;官功昌;梁磊;刘新宏;陈新义;;急性冠状动脉综合征患者血清单核细胞趋化蛋白-1和干细胞因子的变化[J];临床心血管病杂志;2011年07期

2 徐安平;龙霞;李明华;万汇涓;杨会林;于洁;;睾丸移植物中支持细胞相关基因和蛋白表达的研究[J];中国男科学杂志;2010年11期

3 孙钰铭;赵士光;陈小玉;;醋酸铅对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白、抑制素和转铁蛋白mRNA表达的影响[J];郑州大学学报(医学版);2011年04期

4 梅巳;徐仙;陈琰;;干细胞因子与体外受精-胚胎移植的关系[J];宁夏医学杂志;2011年09期

5 王洪;邱学德;李泽惠;曹贵华;钱忠义;陈波;;FSHR和SCF在梗阻性和非梗阻性无精症患者睾丸组织中表达的初步研究[J];昆明医学院学报;2011年07期

6 黄进;张进;徐志伟;;黄芪多糖对体外培养骨髓间充质干细胞增殖和干细胞因子表达的刺激作用[J];复旦学报(医学版);2011年04期

7 支星;魏洁;;Ghrelin与生殖系统研究进展[J];生理科学进展;2011年04期

8 袁玉丰;余盈娟;林琳;;胰岛素样生长因子-1对糖尿病大鼠结肠平滑肌细胞表达干细胞因子的影响[J];胃肠病学;2011年05期

9 赵庆生;冷飞燕;郑伟;石磊芝;杨朋;;干细胞因子SOX2在肺癌中的表达及意义[J];山东医药;2011年28期

10 刘永国;王勤章;丁国富;刘新军;周建民;李应龙;王江平;钱彪;杨兰;;干细胞因子对高糖环境下豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit mRNA及蛋白表达的影响[J];临床与实验病理学杂志;2011年03期

相关会议论文 前10条

1 郑鹏;李冬旭;于磊;黄贺;田亚光;张贵学;;犊牛睾丸支持细胞体外培养与鉴定[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）[C];2010年

2 李渝萍;李蓉芬;周建新;;人膜结合型干细胞因子cDNA的克隆[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年

3 钱雪娇;;支气管哮喘急性发作期血清中干细胞因子与消除严重程度的关系[A];中华医学会2011年全国变态反应学术会议论文集[C];2011年

4 赖东梅;刘特;黄勇;王丽华;程蔚蔚;;原代卵巢癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

5 刘淑艳;王大刚;种靖慧;马翠花;许琳琳;林永敏;吴克复;郑国光;;小鼠膜结合型干细胞因子的克隆及其真核表达载体的构建[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

6 岳保红;张慧;王园园;蔚利纳;刘帅;毛红丽;张钦宪;;核干细胞因子蛋白在p53缺失型HL-60白血病细胞浆内的表达水平检测及意义[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

7 张蔚;;干细胞因子和胰岛素对小鼠小肠Cajal间质细胞的作用[A];第二十二届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2010年

8 王斐;崔巍;陈倩;郭野;杨卓;;干细胞因子SALL4在检测MDS发生发展和判断预后中的临床研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

9 宋杨;高明;吴南翔;杨克敌;;Bax基因家族在p,p'-DDE诱导睾丸支持细胞凋亡中的作用[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年

10 钱雪娇;蒋萍;;支气管哮喘患者急性发作期血清中干细胞因子与哮喘严重程度的关系[A];中华医学会呼吸病学年会——2011（第十二次全国呼吸病学学术会议）论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者　冯国梧;国家干细胞工程中心通过验收[N];科技日报;2006年

2 罗刚 吴志军;重组干细胞因子研究有进展[N];健康报;2003年

3 记者 杜继昌;我国科学家发现一个新干细胞因子[N];新华每日电讯;2004年

4 应庆;干细胞在血液学和外科应用逐步扩展[N];中国医药报;2005年

5 文建平 刘宁宇 肖汉发;“重磅炸弹”基因制造[N];医药经济报;2004年

6 冯国梧;造血干细胞移植治疗血管病取得疗效[N];科技日报;2006年

7 记者　冯国梧;韩忠朝当选法国医科院外籍院士[N];科技日报;2006年

8 杜继昌;我国科学家首次发现ＨＡＰＯ[N];医药经济报;2004年

9 记者 李清华;生物医药优先发展18个领域[N];中国化工报;2001年

10 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;临床应用未到“火候”[N];医药经济报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 刘瑞麟;干细胞因子与支气管哮喘发病的相关实验研究[D];第二军医大学;2002年

2 王克玉;NB-UVB治疗对寻常型稳定期白癜风SCF/c-kit信号通路影响的研究[D];山东大学;2005年

3 况东;SCF/c-kit信号途径介导心脏干细胞迁移[D];华中科技大学;2009年

4 贾后军;小鼠小肠Cajal间质细胞缺失模型的建立及SCF促其恢复研究[D];第三军医大学;2005年

5 童卫东;Cajal间质细胞及c-kit、SCF基因在慢传输性便秘发病中的作用研究[D];第三军医大学;2004年

6 程鹏;大鼠骨髓间充质干细胞向C6胶质瘤趋化迁移机制初探[D];中国医科大学;2008年

7 李春穴;体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞及SCL转基因对其表达c-kit的影响[D];第三军医大学;2005年

8 张林;SCL转基因联合SCF促Cajal间质细胞恢复的在体实验研究[D];第三军医大学;2007年

9 苏立;在体与离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化及其机制研究[D];重庆医科大学;2004年

10 吴星火;联合应用G-CSF/SCF动员、募集及调控自体骨髓衍生干细胞防治骨坏死的实验研究[D];华中科技大学;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 王勇梅;邻苯二甲酸二丁酯损伤大鼠睾丸支持细胞的蛋白质组学研究[D];河北联合大学;2011年

2 陶科;雌二醇对人幼稚型精原干细胞增殖活性影响机制的初步探讨[D];中南大学;2008年

3 张丰泉;微囊藻毒素诱导SD大鼠睾丸支持细胞凋亡效应[D];郑州大学;2011年

4 刘淑艳;干细胞因子对人白血病细胞的作用研究[D];中国协和医科大学;2010年

5 左敬;17beta-雌二醇调节睾丸支持细胞G1/S期转化的机制[D];西南大学;2011年

6 宋远超;多菌灵对雄性大鼠生殖毒性机制的研究[D];济南大学;2011年

7 陈涛;慢性肝病患者外周血清干细胞因子水平及临床意义[D];广西医科大学;2012年

8 王钧;微囊藻毒素-LR 对大鼠睾丸支持细胞氧化应激的影响[D];郑州大学;2010年

9 王磊;葛根素对小鼠睾丸支持细胞急性损伤的保护作用[D];郑州大学;2012年

10 王桂红;干细胞因子在女性生殖过程中作用的初步研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

，

本文编号：2321530