一株减毒荧光假单胞菌的构建及其交叉免疫保护性研究

发布时间：2018-11-21 11:17

【摘要】： 铁吸收调节蛋白（Fur）是革兰氏阴性菌中普遍存在的重要的转录调控因子，它调控着不同的生命活动，包括铁的吸收，细胞的新陈代谢，应激反应以及毒力因子的合成。因此，对于许多病原菌来说，Fur在侵染和致病的过程中起到了关键性的作用。本研究从一株分离自患病牙鲆的荧光假单胞菌TSS中克隆得到了fur基因，并且发现TSS Fur能够与fur基因突变的大肠杆菌部分互补。本研究构建了一株TSS fur基因的缺失突变体TFM。研究发现与TSS相比，TFM的生长能力和抵抗宿主血清杀菌能力减弱，，外膜蛋白表达异常，在宿主血液和组织中的扩散能力显著降低，并且在以牙鲆为模型的感染实验中发现TFM的毒力较TSS大幅下降。将TFM作为减毒疫苗通过注射、浸泡和口服的途径免疫牙鲆后，发现其对荧光假单胞菌和嗜水气单胞菌皆有很好的保护效应。为了进一步扩展TFM的交叉保护范围，本研究进一步构建了表达哈维氏弧菌抗原AgaV-DegQ的质粒pJAQ，并将其转入TFM中得到TFM/pJAQ。研究发现TFM/pJAQ是一种高效交叉保护疫苗，能同时保护牙鲆抵抗荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌以及哈维氏弧菌感染。
[Abstract]:Iron absorption regulatory protein (Fur) is an important transcription regulator in Gram-negative bacteria. It regulates different life activities, including iron absorption, cell metabolism, stress response and virulence factor synthesis. Therefore, for many pathogens, Fur plays a key role in the process of infection and pathogenesis. In this study, the fur gene was cloned from a TSS isolated from infected Paralichthys olivaceus, and it was found that TSS Fur was partially complementary to the Escherichia coli mutated by fur gene. In this study, a TSS fur gene deletion mutant TFM. was constructed. It was found that compared with TSS, the ability of TFM to grow and resist the bactericidal ability of host serum was weakened, the expression of outer membrane protein was abnormal, and the diffusion ability in host blood and tissue was significantly decreased. Moreover, the virulence of TFM was significantly lower than that of TSS in the infection experiment of Paralichthys olivaceus (Paralichthys olivaceus). Using TFM as a attenuated vaccine to immunize Paralichthys olivaceus by injection, immersion and oral administration, it was found that it had a good protective effect on both Pseudomonas fluorescein and Aeromonas hydrophila. In order to further extend the cross-protection range of TFM, the plasmid pJAQ, expressing vibrio Harvey antigen AgaV-DegQ was constructed and transferred into TFM to obtain TFM/pJAQ.. It was found that TFM/pJAQ is a highly effective cross-protective vaccine against Pseudomonas fluorescein, Aeromonas hydrophila and Vibrio Harvey at the same time.
【学位授予单位】：中国科学院研究生院（海洋研究所）
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

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本文编号：2346806