云南省6地域带绦虫形态学及分子鉴定分析研究

发布时间：2018-12-19 13:25

【摘要】：目的：运用形态学和分子生物学方法,鉴定云南省怒江、迪庆、大理、临沧、楚雄和西双版纳6地域带绦虫的种类,计算遗传距离并构建系统发育树；了解三种带(?)虫在云南省的分布情况；为亚洲带绦虫具体的分类定位提供参考依据；为带绦虫病和囊虫病的防治提供科学依据。方法：(1)形态学鉴定：对采自云南省6地域的14株带绦虫的头节和成节进行盐酸卡红染色,孕节进行孔雀绿染色,进行形态学鉴定,与猪带绦虫和传统牛带绦虫比较,初步判断带绦虫的种类；并结合亚洲带绦虫标准株(大理株)的头节电镜图,探讨亚洲带绦虫头节形态。(2)带绦虫基因组DNA PCR-RAPD分析：在形态学鉴定的基础上取14株带绦虫标本株,2株亚洲带绦虫标准株(大理株和都匀株)和1株牛带绦虫标准株的成节或孕节节片,提取总DNA,随机选择12条引物进行PCR-RAPD分析,SPSS软件计算不同地理株的遗传距离,并构建系统发育树状图。(3)带绦虫mtDNA COXI基因序列测定分析：以14株带绦虫标本株总DNA为模板,分别PCR扩增mtDNA COXI区段,并做序列测定,结合GenBank中已知的猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫mtDNA COXI序列,经DNA MAN软件处理后计算遗传距离,并构建系统发育树状图。结果：(1)形态学鉴定显示：DL1头节呈球形,具有顶突和2圈小钩,成节卵巢分为3叶,孕节分支不整齐,每侧分支约为7～13支,多基部分叉,属猪带绦虫；NJ1～NJ4及DQ1～DQ3共7株标本头节方形,有微小突起,无小钩,成节卵巢分2叶,孕节分支整齐,每侧分支约15～25支,属亚洲带绦虫；DL2～DL4、LC1、CX1和BN1头节呈方形,无顶突和小钩,成节卵巢分2叶,孕节分支整齐,每侧分支约15～28支,不能断定为传统牛带绦虫或亚洲带绦虫。(2)带绦虫基因组DNA PCR-RAPD分析显示：12条随机引物共扩增片段134个(以相同bp数为依据),单条引物扩增片段范围为3～22个,平均扩增片段在11.17个。P1～9和P11可扩增出特异条带。亲缘关系树状图显示：NJ1～4、DQ1～3、DL2～4与BZl和BZ3汇为一支,属于亚洲带绦虫；LC1、BN1、CX1和BZ2汇为一支,属于传统牛带绦虫；两支结合后与DL1结合。(3)带绦虫mtDNA COXI基因序列测定分析显示：NJ4、NJ1和DQ2的遗传距离为0.002,DL4和NJ3的遗传距离为0.005,NJ2和DQ3的遗传距离为0.012,DL2与GB3的遗传距离为0.017,而与GB2的遗传距离较远,为0.037；NJ1～4、DL2～3及DQ1～3共10株标本株与GB3聚为一支,属于亚洲带绦虫；BN1、CX1、LC1与GB2聚为一支,属于传统牛带绦虫：两支交汇后再与由DL1和GB1聚合的一支汇合。结论：(1)云南省存在三种带绦虫的流行,其中怒江和迪庆为亚洲带绦虫,西双版纳,楚雄和临沧为牛带绦虫,大理存在三种带绦虫的重复流行；(2)云南亚洲带绦虫头节存在有顶突和无顶突两种形态,传统形态学方法很难将无顶突的亚洲带绦虫和传统牛带绦虫区分。(3)PCR-RAPD技术和mtDNA COXI片段序列的测定分析均可以弥补形态学鉴定的不足,为三种带绦虫的鉴定提供可靠的分子依据；(4)PCR-RAPD技术和mtDNA COXI片段序列的测定分析可用于带绦虫的遗传多态性研究,为亚洲带绦虫具体的分类定位提供参考依据。(5) PCR-RAPD技术可以筛选出特异的基因片段用于带绦虫的分类鉴定
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【学位授予单位】：大理学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R383.32

【引证文献】