登革病毒1-4型E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白的表达纯化及功能研究

发布时间：2019-01-10 18:24

【摘要】：目的研究原核表达的登革病毒(dengue virus,DV)1-4型融合的E蛋白结构域III直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用;研究rEIII融合蛋白在昆虫表达系统的分泌表达情况,探讨不同表达系统对融合蛋白功能的影响。 方法①通过连接肽将1-4型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区串联起来,将串联基因产物插入PET30a在大肠杆菌中进行表达、纯化后,应用Western blot及间接ELISA验证表达产物。将融合蛋白新西兰大白兔制备免疫血清,应用间接免疫荧光检测以确定多抗血清的活性。将融合蛋白及多抗血清分别进行阻断实验和中和实验,对抗原及抗体的功能进行研究。②将rEIII基因克隆到杆状病毒表达载体pAcSecG2T上,转染SF9细胞,传代增强毒力,间接免疫荧光结果显示,融合蛋白在昆虫表达系统中传代5代后表达明显增强,分别收集细胞及细胞培养液.ELISA及Western blot检测融合蛋白分泌表达情况。 结果在大肠杆菌中成功表达了串联的登革病毒1～4型E蛋白结构域III融合蛋白,并得到兔抗免疫血清,分别对融合蛋白及兔抗免疫血清进行验证,进行了一系列功能试验。融合蛋白能够阻断1-4型DV感染,兔抗免疫血清能中和1-4型DV,但中和抗体效价不同。同时利用昆虫表达系统表达纯化了真核rEIII融合蛋白,为以后登革病毒抗原表位的筛选和疫苗研究打下了基础。 结论串联表达的登革病毒包膜蛋白Ⅲ区可抑制登革病毒感染,串联rEⅢ蛋白免疫新西兰大白兔产生的针对DV1-4型包膜蛋白结构域Ⅲ区的抗体对登革病毒具有中和作用。融合蛋白可以在昆虫表达系统细胞内高表达,但极少分泌。
[Abstract]:Objective to study the direct inhibition of dengue virus (dengue virus,DV) infection and neutralization of antibodies by the fusion of E protein domain III of prokaryotic expression of dengue virus (dengue virus,DV) 1-4. To study the secretory expression of rEIII fusion protein in insect expression system and the effect of different expression system on the function of the fusion protein. Methods 1Recombinant peptide was used to connect the 1-4 dengue virus envelope protein 鈪，

本文编号：2406643