与C6胶质瘤细胞体外共培养后大鼠神经干细胞成瘤性的初步观察

发布时间：2019-03-20 19:10

【摘要】： 目的: 探索体外肿瘤微环境中正常大鼠神经干细胞是否可以发生恶性转化而具有相关肿瘤学特性。 方法: 1.利用共培养池(cell culture transwell inserts)建立两种细胞的体外共培养模型。具体分组为:①实验组:C6胶质瘤细胞+神经干细胞,②对照组:星形胶质细胞+神经干细胞,③空白对照组:无细胞的培养液+神经干细胞。 2.应用相差显微镜及电镜观察共培养后NSCs的形态变化。 3.四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测共培养后NSCs的增殖变化。 4.免疫荧光细胞染色技术检测共培养后NSCs P53蛋白表达情况。 5.染色体核型分析检测共培养后NSCs的染色体变化。 6.将共培养后NSCs接种于裸鼠颅内观察成瘤情况。 结果: 1.成功建立两种细胞的体外共培养模型。 2.共培养后NSCs形态变化:①相差显微镜下观察可见:与对照组相比,实验组共培养7天后NSCs较对照组细胞球体积变大、细胞数目相对较多,镜下可见与对照组在形态上有较明显的差别;②电镜下观察可见:与对照组相比,实验组共培养7天后NSCs细胞核较大,核质比较高,染色质疏松,细胞器也较发达(粗面内质网、线粒体较多)。对照组NSCs胞浆较多,细胞器欠发达。 3. MTT法检测显示实验组中与C6胶质瘤细胞共培养后的NSCs增殖较对照组快。 4.实验组共培养7、14天后NSCs细胞核上未见P53蛋白阳性表达,共培养28天后部分NSCs细胞核上P53蛋白呈阳性表达;对照组及空白对照组共培养7、14、28天后NSCs细胞核上P53蛋白均未见阳性表达。 5.实验组、对照组及空白对照组共培养7、14、28天后的NSCs核型分析结果均为正常。 6.实验组、对照组及空白对照组共培养7、14、28天后的NSCs接种裸鼠颅内均未见肿瘤形成。 结论: 1. C6胶质瘤细胞对体外共培养体系中的大鼠神经干细胞的增殖有一定促进作用。 2.部分大鼠神经干细胞经C6胶质瘤细胞直接诱导后可以表达P53蛋白,提示肿瘤微环境可以造成干细胞基因表达异常。
[Abstract]:Aim: to explore the malignant transformation of neural stem cells (NSCs) from normal rats in tumor microenvironment in vitro, and to explore the oncology characteristics of normal rat neural stem cells (NSCs). Methods: 1. Co-culture model of two kinds of cells in vitro was established by co-culture cell (cell culture transwell inserts). The specific groups were as follows: 1 experimental group: C6 glioma cell neural stem cells, 2 control group: astrocyte neural stem cells, 3 blank control group: acellular culture medium neural stem cells. 2. The morphological changes of NSCs after co-culture were observed by phase contrast microscope and electron microscope. 3. The proliferation of NSCs after co-culture was detected by (methyl thiazolyl tetrazolium,MTT colorimetry. 4. Immunofluorescence staining technique was used to detect the expression of NSCs p53 protein after co-culture. 5. Chromosome karyotype analysis was used to detect the chromosome changes of co-cultured NSCs. 6. Co-cultured NSCs was inoculated in nude mice to observe the formation of tumor. Results: 1. The co-culture model of two kinds of cells in vitro was established successfully. 2. The morphological changes of NSCs after co-culture: 1 observation under phase contrast microscope: compared with the control group, after 7 days of co-culture in the experimental group, the volume of NSCs became larger than that of the control group, and the number of cells was relatively larger than that of the control group. There were obvious differences in morphology between the two groups under microscope and in the control group. (2) observation under electron microscope: compared with the control group, the nucleus of NSCs was larger, the nucleus was higher, the chromatin was loose, and the organelles were more developed (rough endoplasmic reticulum, mitochondria more) after 7 days of co-culture in the experimental group. In the control group, the cytoplasm of NSCs was more and the organelles were less developed. 3. MTT assay showed that the proliferation of NSCs co-cultured with C6 glioma cells in the experimental group was faster than that in the control group. 4. There was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs at 14 days after co-culture in the experimental group, and in some NSCs nuclei after 28 days of co-culture, while in the control group and the blank control group, there was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs at 7 and 14 days after co-culture, and there was no positive expression of p53 protein in the nucleus of NSCs after 28 days. 5. Experimental group, control group and blank control group were cultured for 7, 14, and 28 days later, the results of NSCs karyotype analysis were normal. 6. The experimental group, the control group and the blank control group were cultured for 7, 14, and 28 days after NSCs inoculation, no tumor formation was observed in the brain of the nude mice. Conclusions: 1. C6 glioma cells could promote the proliferation of rat neural stem cells in vitro co-culture system. 2. Some rat neural stem cells were directly induced by C6 glioma cells to express p53 protein, suggesting that tumor microenvironment can cause abnormal expression of stem cell gene.
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

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