用牛冠状病毒N蛋白作为模式抗原研究壳聚糖微球的缓释作用

发布时间：2019-04-09 16:24

【摘要】： 随着免疫学研究的不断深入和基因工程技术的迅速发展,针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制,但这些疫苗普遍存在分子小、免疫原性弱、难以诱导机体产生有效免疫应答等不足,从而需要某种物质来弥补这种不足,免疫佐剂就在这种情况下产生了。传统佐剂有许多缺陷,如引起局部炎症反应、致癌、不易在体内降解等,所以需要研发新型佐剂来克服上述缺点。壳聚糖(Chitosan)是甲壳素脱乙酰化的产物,是一种天然的阳离子聚合物,无毒无害,安全可靠,易生物降解,而且具有延长抗原释放从而提高免疫应答水平的作用,所以壳聚糖具有开发成为新型佐剂的潜在价值。由于模式抗原对于佐剂的评价影响很大,所以寻找一种免疫原性强、纯度高而且易于获取的模式抗原就显得至关重要。冠状病毒的核衣壳蛋白具有相对保守性和强免疫原性,而且不受糖基化和蛋白修饰作用的影响,符合模式抗原的基本要求。本研究首先用大肠杆菌高效表达了牛冠状病毒核衣壳蛋白(Bovine coronavirus N protein),继而用其作为模式抗原对壳聚糖微球的缓释作用进行免疫学效果的评价。 本实验采用乳化交联法制备壳聚糖微球,其平均粒径为5μm,电势分布在36mV左右,形状规则、表面光滑并且分散性良好,不易团聚,体系稳定。人工合成的牛冠状病毒DB2毒株N蛋白基因的3′端(487-1287nt)用大肠杆菌实现了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的50.5%。用切割目的蛋白条带进行电洗脱的提纯方法,获得大量高纯度的BCV N蛋白,蛋白浓度达到14.77mg/ml。采用吸附法将壳聚糖微球用BCV N蛋白进行包埋,载药量和包封率分别达到16.49%和65.62%。然后将此载BCV N蛋白的壳聚糖微球通过肌肉途径注射BALB/c小鼠,同时设立法国佐剂ISA 206 VG对照组、唯N蛋白对照组和空壳聚糖微球对照组。免疫动物用间接ELISA方法检测血清中的抗体水平及其动态,由此评价壳聚糖微球对BCV N的缓释作用和佐剂效应。 结果表明,吸附BCV N蛋白的壳聚糖微球在体内所产生的免疫效果明显优于唯N蛋白对照组,说明载BCV N蛋白的壳聚糖微球在体内具有一定的缓释效果,使N蛋白在体内缓慢释放而长时间诱导抗体的产生,该研究结果为以壳聚糖微球作为疫苗佐剂积累了实验数据。但是与法国佐剂ISA 206 VG组相比,壳聚糖微球的佐剂效应还存在一定的差距,这可能与壳聚糖微球的粒径分布和比表面积的大小有直接的关系,有待于进一步研究。
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【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R94;R392

【参考文献】

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本文编号：2455332