高碘对大鼠凝血功能及下腔静脉血管内皮形态的影响

发布时间：2019-05-03 18:51

【摘要】： [目的] 本实验通过给大鼠喂以偏食和高碘水,建立偏食高碘大鼠模型,综合运用凝血指标的测定、血浆中HCY的测定、大鼠下腔静脉肝段的HE染色及相关因子免疫组化观察,观察不同浓度的高碘对大鼠凝血功能的作用及高碘对大鼠下腔静脉血管内皮细胞形态的影响,并探讨高碘对大鼠凝血功能和血管内皮细胞的作用机制。【方法】 1.实验动物与分组：选用断乳后1个月左右,体重100-120g远交封闭群的Wistar大鼠(购自山东大学动物实验中心,属SPF/VAF级动物),根据体重和性别随机分为8组,次序为：①正常对照组：正常饲料+正常水组；②正常饲料+10倍碘组；③正常饲料+50倍碘组；④正常饲料+100倍碘组；⑤偏食对照组：偏食饲料+正常水组。⑥偏食饲料+10倍碘组；⑦偏食饲料+50倍碘组；⑧偏食饲料+100倍碘组,每组8只。 2.记录大鼠体重数据：以上各组动物每周称量体重,记录。喂养6个月。 3.各项凝血指标测定：用乙醚麻醉后,枸橼酸钠抗凝管通过眼球静脉取血,离心分离血浆后,用CA7000全自动凝血分析仪,测定凝血酶原时间(PT-time)、凝血酶原时间国际标准化比值(PT-INR)、活化部分凝血酶原时间(APTT-time)、纤维蛋白原时间(Fbg-time)、纤维蛋白原浓度(Fbg-c)、凝血酶时间(TT)抗凝血酶Ⅲ活性(AT3：A)和D-二聚体(D-dimer)。 4.测定各组大鼠血液HCY的含量。 5.大鼠下腔静脉HE染色：取用10%福尔马林固定的大鼠下腔静脉,常规石蜡包埋,切片,常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水,苏木素染色5min,自来水冲洗。盐酸乙醇分化30s。自来水浸泡15min。常规脱水,透明,封片,观察其内皮细胞的变化。 6.大鼠下腔静脉免疫组织化学：组织切片通过脱蜡和水化,抗原修复后,PBS冲洗,滴加一抗、二抗,进行DAB显色,观察ET-1、ICAM-1在下腔静脉血管内皮细胞中的表达。【结果】 1.大鼠体重的变化干预2、4、6个月时,各正常饲料+高碘饮水组的大鼠体重与NI组大鼠相比无明显差别；偏食对照组(BNI)直到第6个月体重才与NI组显出统计学差异；干预2、4、6个月时,各偏食饲料+高碘饮水组大鼠体重均明显低于NI组。 2.大鼠各项凝血指标各正常饲料+高碘饮水组的大鼠与正常对照组相比,10HI组的大鼠的各指标PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、APTT、TT和AT3%数值降低,纤维蛋白原浓度(Fbg-c)数值升高,差异显著(PT、PT-INR、Fbg-Time、AT3%:p0.05, TT、APTT、Fbg-c:p0.01);而50HI和100HI组的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、TT和APTT数值升高,纤维蛋白原浓度(Fbg-c)数值降低(除50HI的Fbg-Time、TT、Fbg-c:p0.05,50HI、100HI两组的其它指标均p0.01)(见表1)。DD各组无明显差异。各偏食对照组与正常对照组相比,B10HI组的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、APTT、TT和AT3%数值降低,纤维蛋白原浓度(Fbg-c)数值升高(除APTT p0.01外,其余各项无统计学意义)而BNI、B50HI和B100HI组的大鼠PT-Time、PT-INR、Fbg-Time、TT和APTT数值升高,纤维蛋白原浓度(Fbg-c)数值降低。(除B50HI组的TT无统计学意义外,其余的数值P0.01)。各偏食对照组与各正常饲料+高碘饮水组的大鼠相比,凝血功能降低。 3.高碘组大鼠的内皮细胞功能受到了一定影响,HCY含量发生了变化：随着碘浓度的逐渐升高,HCY的含量逐渐升高。与正常对照组(NI)相比,10HI组,50HI组,100HI组,B10HI组,B50HI组,B100HI组的HCY含量升高差异显著(除了10HI组数值无统计学意义外,其余各组p0.01) 4.高碘组内皮细胞形态发生了变化,随着碘浓度的逐渐升高,大鼠下腔静脉内皮细胞出现增生现象,偏食组比正常饲料组明显。 5.大鼠下腔静脉免疫组化结果显示,高碘组下腔静脉内皮细胞的ET-1,ICAM-1达显著增加,偏食组比正常饲料组明显。而正常对照组表达较弱。【结论】 1.本研究提示高碘对大鼠凝血功能有促进和降低的双重作用,这种作用与碘的剂量有关。适量的高碘促进凝血功能,但随着碘浓度的升高表现出降低凝血功能的作用。偏食能降低大鼠凝血功能。 2.形态学研究发现,高碘可致下腔静脉内皮增生、变厚,同时内皮下层细胞外间质增多；ET-1、ICAM-1表达明显,和投碘剂量增多有关,偏食组尤为明显,提示在该动物模型中高碘通过刺激内皮细胞损伤与增殖,在下腔静脉局部引起纤维组织增生。 3.在该动物模型中高碘可致血浆同型半胱氨酸升高,偏食组尤为明显,提示在检测同型半胱氨酸可作为判断内皮损伤的指标。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R361.2

【引证文献】