Cajal间质细胞上M受体介导的胆碱能信号在输尿管自主收缩中的作用研究

发布时间：2019-05-05 19:02

【摘要】： 背景与目的: Cajal间质细胞原来被认为是仅存在于胃肠道的一种特殊类型细胞,起着起搏胃肠道慢波、传递电信号、介导肠神经与平滑肌之间调节信号的作用,与病理状态下的多种胃肠动力紊乱疾病(如便秘、假性肠道梗阻等)密切相关,是胃肠道平滑肌节律性收缩功能调节的重要因素。后来,在胃肠道外其他组织中发现了与胃肠道Cajal间质细胞免疫学特性相同、形态学特点相似的细胞,既往曾称之为ICC样细胞(ICC-like cells),目前已统称为Cajal间质细胞(ICCs)。生理情况下,输尿管平滑肌具有与胃肠道十分相似的特点,即存在不依赖于神经的自发性蠕动,但确切机制目前尚未阐明。目前已有的研究发现,在豚鼠和人的全尿路均存在ICCs。有文献报道,先天性肾盂输尿管梗阻的患儿肾盂和输尿管ICCs较正常儿童明显减少,提示ICCs与输尿管兴奋起源和调控有密切关系。进一步研究ICCs在输尿管自主收缩中的作用及其对神经递质的反应,有助于阐明ICCs在输尿管平滑肌功能调控中的作用及其机制,为上尿路功能障碍性疾病的治疗提供新的切入点。本课题通过肌条实验观察离体的豚鼠输尿管肌条,在使用非特异性M型胆碱能受体激动剂卡巴可前后自主收缩的变化,并在特异性阻断ICCs功能后,观察肌条的自主收缩及对卡巴可的反应是否发生改变,此外还应用免疫荧光双标染色法检测输尿管ICCs上M受体亚型的表达情况,从而为阐明ICCs上M受体介导的胆碱能信号在输尿管平滑肌自主收缩中的作用提供新的实验依据。方法: 实验动物均采用清洁级健康Hartley豚鼠。(1)卡巴可对输尿管平滑肌自主收缩的影响及ICCs在此影响中的作用:将20只豚鼠随机分为正常对照组、阻断ICCs组,每组10只。阻断ICCs组的肌条检测前平衡及检测中均置于含终浓度10-4mol/L Glivec的Kreb’s液中,正常对照组置于不含Glivec的Kreb’s液中。取豚鼠左侧输尿管上段1.0cm组织制成离体平滑肌肌条,检测其在终浓度为10-4mol/L卡巴可作用前后的自主收缩频率和幅度。(2)输尿管ICCs上M受体亚型的表达情况:通过c-kit+M1～M5免疫荧光双标染色法检测豚鼠输尿管ICCs上M受体亚型的表达情况。结果: (1)在一定前负荷(2.0g)下,加入1mol/L KCl溶液200μL可诱发正常对照组豚鼠的离体输尿管平滑肌肌条出现自主收缩,频率为(3.4±0.84)次/分,波幅为(0.105±0.0228)g。 (2)在肌条出现稳定的自主收缩后,加入0.01mol/L卡巴可100μL,肌条自主收缩频率为(4.9±0.88)次/分,较加药前明显增快(p0.01);而收缩幅度为(0.106±0.0210)g,较加药前无明显变化(p0.05)。 (3)用10-4mol/L Glivec平衡30分钟、特异性阻断ICCs后,同法进行检测发现,阻断ICCs组的输尿管肌条无自主收缩出现,加入0.01mol/L卡巴可100μL仍无反应。 (4)免疫荧光双标染色发现,豚鼠输尿管ICCs上表达M2、M3两种M受体亚型。结论: ICCs很可能是输尿管平滑肌自主收缩兴奋的起源,并通过M2、M3受体亚型接受胆碱能神经的调控。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R339.2

【参考文献】