微小隐孢子虫子孢子黏附相关蛋白质的筛选及定位

发布时间：2019-05-14 19:53

【摘要】： 为了筛选微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因,提取微小隐孢子虫总RNA并分离mRNA,通过反转录酶合成cDNA,将EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端连到双链cDNA的两端,定向插入到T7 Select 10-3b载体,用包装蛋白进行包装并对初始文库进行扩增,构建微小隐孢子虫噬菌体展示文库。用微小隐孢子虫易感的Caco-2细胞和高免血清对构建好的文库进行筛选,并对筛选得到的部分蛋白质进行定位。 本试验构建的微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库未扩增文库的滴度为3.3×10~7pfu/mL,文库容量为1.0×10~7个重组子,文库重组率为94%,92%的插入片段大于300bp,扩增后文库滴度为3.1×10~(10)pfu/mL。用Caco-2细胞筛选到5个微小隐孢子虫黏附相关蛋白质,其中1个为已知蛋白质CP2,已有报道推测其参与子孢子与宿主上皮细胞的黏附过程。其余4个蛋白质功能未知。用微小隐孢子虫高免血清筛选到3个蛋白质,其中1个为已知蛋白质CP2,另2个蛋白质功能未知。对筛选出来的两个蛋白质基因(CP389和CP245)的部分编码区进行原核表达,分别命名为rCP389和rCP245,通过免疫荧光定位证实,CP389和CP245在卵囊壁和子孢子表面均有表达,推测筛选得到的蛋白质可能参与了子孢子与宿主的黏附过程。本研究为揭示隐孢子虫的致病机制提供了依据。
[Abstract]:In order to screen the adhesion related protein gene of Cryptosporidium parvum, the total RNA of Cryptosporidium parvum was extracted and mRNA, was isolated and the viscous ends of EcoR 鈪，

本文编号：2477004