bFGF、EGF及复合因子诱导大鼠BMSCs向成纤维细胞增殖分化的实验

发布时间：2019-07-22 12:28

【摘要】： 目的: 研究含不同浓度的EGF和bFGF及各组组合浓度复合因子诱导培养液对大鼠BMSCs向成纤维细胞的增殖分化作用。探讨生长因子体外诱导BMSCs增殖分化的的最佳种类及浓度,为构建组织工程韧带提供理想的种子细胞来源。方法: 1贴壁法体外培养骨髓间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞生长增殖情况,MTT测定骨髓间充质干细胞原代及传代1~8天增殖情况,免疫组化对骨髓间充质干细胞进行鉴定。 2含2ng/ml、20ng/ml的bFGF、EGF及组合浓度的复合因子诱导培养液代替正常培养液对第三代骨髓间充质干细胞进行诱导分化,MTT检测不同诱导液诱导后细胞增殖情况,免疫组化对诱导后成纤维细胞进行鉴定。结果: 1倒置显微镜下观察,骨髓间充质干细胞24h后开始贴壁,形状由圆形变为梭形,细胞核明显,胞浆比较大;骨髓间充质干细胞传三代后细胞呈梭形,少数为多角形,细胞融合后细胞呈涡旋或放射状排列。 2 MTT检测结果显示:骨髓间充质干细胞呈“S”形曲线生长。原代细胞第二天进入对数生长期,传代细胞第四天进入对数生长期。 3免疫组化结果显示:骨髓间充质细胞表面抗原CD34和Laminin表达为阴性,Vimatin和α-SMA为阳性表达;诱导后,细胞Laminin表达转为阳性。 4 MTT(7、14天)和免疫组化结果表明: ①bFGF或EGF以及复合因子均能诱导骨髓间充质干细胞成功分化为成纤维细胞; ②相同浓度的bFGF组和EGF组之间诱导效果比较无显著性差异; ③低浓度诱导组2ng/mlbFGF组、2ng/ml EGF组、2ng/ml bFGF + 2ng/mlEGF组与对照组相比无显著性差异; ④高浓度诱导组20ng/ml bFGF组、20ng/ml EGF组、20ng/ml bFGF + 2ng/ml EGF组、2ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF和20ng/ml bFGF + 20ng/ml EGF较对照组增殖显著加快,诱导分化为成纤维细胞的能力最强,但高浓度组之间无显著性差异。结论: 1全骨髓贴壁培养法可成功培养体外骨髓间充质干细胞,并获得理想的细胞纯度; 2不同浓度的bFGF或EGF以及复合因子均能诱导骨髓间充质干细胞成功分化为成纤维细胞,20ng/ml是促进BMSCs增殖分化较为理想的浓度; 3相同浓度下bFGF和EGF对促进BMSCs分化增殖的作用基本相同; 4联合应用bFGF和EGF对BMSCs诱导效果与单独使用bFGF、EGF无显著性差异。
【图文】：
骨髓间充质干细胞对α-SMA呈阳性表达（x200）

3. BMSCs的免疫组化表型检测免疫组化染色结果显示：① 体外培养的骨髓间充质干细胞表面抗原Vimatin、α-SMA表达结果为阳性。（图1，图2）② Laminin（成纤维细胞特异性抗原）和CD34为阴性表达（图3，图4），说明未向成纤维细胞和内皮细胞分化。图 1 骨髓间充质干细胞对 α-SMA 呈阳性表达（x200）图 2 骨髓间充质干细胞对 vimatin 呈阳性表达（x400）
骨髓间充质干细胞对vimatin呈阳性表达（x400）

免疫组化染色结果显示：① 体外培养的骨髓间充质干细胞表面抗原Vimatin、α-SMA表达结果为阳性。（图1，，图2）② Laminin（成纤维细胞特异性抗原）和CD34为阴性表达（图3，图4），说明未向成纤维细胞和内皮细胞分化。图 1 骨髓间充质干细胞对 α-SMA 呈阳性表达（x200）图 2 骨髓间充质干细胞对 vimatin 呈阳性表达（x400）
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

【参考文献】