靶向Hes-1 siRNA干扰对Th17细胞分化的影响

发布时间：2019-07-30 16:48

【摘要】： 目的：初步探讨靶向Hes-1 siRNA干扰对Th17细胞分化的影响。方法：分离小鼠淋巴结细胞,Trizol法提取总RNA, RT-PCR技术检测不同时间Jagged-1蛋白和γ分泌酶抑制剂DAPT (The y-secretase inhibitor N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-phenylg lycinet butyl ester, DAPT)对外周T淋巴细胞Hes-1和Deltex-1 mRNA表达的影响；WesternBlot分析不同时间和不同浓度Hes-1 siRNA干扰对外周T淋巴细胞Hes-1蛋白表达的影响；Elisa检测靶向Hes-1 siRNA干扰对外周T淋巴细胞IL-17细胞因子分泌的影响；荧光标记单克隆抗体染色技术结合流式细胞仪检测靶向Hes-1 siRNA干扰后外周CD4+T淋巴细胞及其胞内IL-17和IFN-γ的变化。结果：Jagged-1能促进Hes-1 mRNA的表达,以第3d的作用最为明显,第5d作用有所减弱；DAPT组Hes-1 mRNA的表达明显低于空白对照组。Jagged-1组Deltex-1 mRNA表达明显升高,第2d达到高峰；DAPT作用1d后Deltex-1 mRNA的表达低于空白对照组,第2d开始升高,第3d高于空白对照组。Jagged-1和Hes-1siRNA作用12h,Hes-1蛋白表达无明显变化；Jagged-1作用24h,Hes-1蛋白表达开始升高,36h达到高峰,持续至48h，72h后Jagged-1组Hes-1蛋白表达下降。Hes-1 siRNA作用24h后Hes-1蛋白表达下降,在36h降至最低,一直持续至72h；作用36h,100 nmol／LHes-1 siRNA能明显降低Hes-1蛋白表达,与200 nmol／L、250 nmol／LHes-1 siRNA组相比无明显差异。流式分析显示,Jagged-1组CD4+T淋巴细胞胞内IL-17表达明显降低,而Hes-1 siRNA则促进外周CD4+T淋巴细胞胞内IL-17表达。结论：Jagged-1能激活Notch信号通路,抑制外周CD4+T淋巴细胞分泌IL-17。靶向Hes-1 siRNA能下调Jagged-1-Notch信号,促进外周CD4+T淋巴细胞向Th17细胞分化。
【图文】：

图1Notch信号通路[4]Fig1.Notehsignalpathw盯[4]Notch信号除了依赖csL途径外，还有不依赖csL的途径[6J。2002年，Martinez等通较果蝇Su(H)和Notch两种突变体发现，Su(H)突变和Notch突变所造成的表型完全一致，表明可能还存在一条不依赖于Su(H)的Notch信号通路，后来用on七nction的方法也证实了这一点。此外还发现某些可与NlcD结合的蛋白也介导cs赖的信号。CSL的非依赖途径通常表现为3种情况:(l)仅仅表现在NICD与非CS成员的其它转录因子相互作用，例如NICD与Mef或Lef-l的相互作用;(2)表现在ch与细胞内其它蛋白相互作用，，这种作用的结果不是影响基因表达而是直接改变了目白的功能，例如Notch能在细胞质直接改变果蝇转录调节子Musashi的功能;(3)Notch不必释放NICD就可以行使一些生物功能。

靶向Hes-1 siRNA干扰对Th17细胞分化的影响

和功能【’“]。调节性T细胞在预防和抑制自身免疫性疾病、炎症、变态反应和移植排斥中有非常重要的作用117]。随着对自身免疫病研究的深入，人们发现很多现象不能用传统的Thl/Th2模式来解释，直至发现了一种新的细胞亚群—Thl7细胞(图3)。勿一圈口一唇付巡一画L·粼比，13，黔蘸蒸翼耀二2谕:!L一17............闷卜图3初始T淋巴细胞分化153] Fig3.InitialTeelldifferentiation[53]Thl7细胞的发现源于非限制性自身免疫病的研究。一直以来，我们认为Thl的失调会引起炎症并诱导自身免疫病。过去一直认为的小鼠自身免疫病模型一实验性自身免疫性脑脊髓炎 (expermientalautoimmuneeneephalomyelitis，EAE)是IL一12诱导的Thl细胞所介导，最近研究发现，敲除IL一12或IFN一Y基因后，小鼠的自身免疫性炎症非但没有减轻反而更加严重。在EAE小鼠的中枢神经系统中可检测到大量产生IL一17的CD4+T细胞浸润，将此类细胞过继转移给健康小鼠可以诱发严重的EAE
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

【参考文献】