p55、paxillin、vinculin在早期胰腺中的表达模式分析

发布时间：2019-07-30 17:11

【摘要】：p55基因编码一个从线虫到人类非常保守的蛋白,它与人类HSPC117高度同源。HSPC117是一细胞黏附相关蛋白,可以结合纽蛋白(vinculin),vinculin能够与桩蛋白(paxillin)结合,以减少paxillin-FAK的相互作用,从而调控细胞存活和运动。但p55、vinculin和paxillin在胰腺发育中的作用还不清楚。为了探索p55、vinculin和paxillin在小鼠胰腺发育中的时空表达模式,了解p55、vinculin和paxillin在胰腺发育中的功能,本研究从小鼠胰腺中克隆了vinculin和paxillin基因片段;通过半定量RT-PCR方法检测了p55在小鼠胚胎发育E12.5、E13.5、E15.5、E17.5和出生后及成体的表达变化;通过原位杂交、免疫组化研究了p55、vinculin和paxillin在胚胎期E10.5、E12.5、E13.5、E15.5、E17.5胰腺的时空表达谱。半定量RT-PCR结果表明,P55 mRNA在E12.5、E13.5、E15.5、E17.5、出生到成体胰腺中均有表达,但整体表达水平变化不大。通过整体原位杂交方法没有检测到E10.5胰芽中p55 mRNA的表达。通过原位杂交和免疫组化联合染色发现,p55在E12.5和E13.5天胰腺的上皮分支末端细胞中有较强表达;在E15.5的全部胰腺上皮中均有表达,但单个细胞中的p55表达强度下降;E17.5天胰腺没有检测到p55的表达;paxillin在胰腺上皮中的表达模式与p55相似,但paxillin在胰腺间质中也维持低水平的表达。vinculin仅在胰腺上皮中表达,从E12.5到E15.5天的变化幅度不大,到E17.5天表达下降。因而,p55在胰腺发育的第二次转换前后高表达于胰腺上皮外周分支生长的末端,paxillin和vinculin在此区域同样也有较高水平的表达,暗示它们可能与胰腺发育过程中上皮分支生长时细胞的迁移和黏附有关。
【图文】：

p砧在早期胰腺发育中的E15.5、E17.5、出生及成年的小一些差异，这是研究胚胎发育除这种客观存在的差异，即同之间的个体差异，，而每个时间通过以上的处理我们可以认为表达分析且活性稳定，因此在提取RN到较高的纯度和较好的完整性。15.5，E17.5，出生及成体胰腺，利用其纯度和浓度达，0D2司OL处

p55、paxillin、vinculin在早期胰腺中的表达模式分析

M.DL20(旧 Maker1.成体2.出生 3.E17.54.E15.55.E13.56.E12.5将各时期RNA调节成扭卵l后，反转录PCR，通过选取E12.5和E17.5两个时间点胰腺RNA在25循环、28循环、35循环不同循环参数的摸索(如图2一1)，最终确定32为最佳循环参数。以持家基因T入IA结合蛋白(珊玛为内部参照，我们检测了p55在不同发育时期的表达情况，夕”扩增片段为878bP;TBP扩增片段为190bp(如图2一2)。对电泳结果进行灰度扫描，并用每个样品的p55电泳条带灰度/TBP电泳条带的灰度比值作为各个时期p”的表达情况。结果显示，各个发育阶段均可检测到p”基因mRNA的表达;成体的表达略低于胚胎期，从胚胎早期E12.5至E15.5天表达略有增加E15.5天后表达又呈下降趋势，但总体上将各个时期变化不大(如图2一3)。........生出名咧侧Z山山贬名日l了).刃二口叫成体 e17.5els.5e13.5el2.图2一胰腺不同时期尸”基因的表达2.4.2基因克隆分析以E13.5的RNA逆转录得到的cDNA为模板
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R363

【参考文献】