人吸脂来源的干细胞与脂肪细胞共培养的研究
发布时间:2019-08-02 19:19
【摘要】: 脂肪干细胞不仅具有跟骨髓间充质干细胞相似的多向分化潜能,而且具有取材方法简便、来源广泛、患者创伤小等优势,这都使其成为近年来干细胞研究领域中的热点。干细胞应用的一个重要方向就是脂肪组织工程,由于脂肪干细胞具有上述优点,这无疑令脂肪干细胞成为构建工程脂肪组织的种子细胞的最佳选择,如何实现脂肪干细胞的成脂分化,是构建工程脂肪组织重要的研究课题。 本实验目的在于对通过共培养人体吸脂来源的脂肪干细胞与脂肪细胞,促使脂肪干细胞进行成脂分化,并通过各种生物学检测手段,观察干细胞经过共培养后的成脂分化效果。 具体方法是:首先采用胶原酶消化的方法,从吸脂手术来源的人体脂肪组织中,分别分离得到人体脂肪干细胞和脂肪细胞。对分离得到的脂肪细胞在显微镜下进行细胞形态观察、特异性的油红O染色并拍照观察、台盼蓝死活染色并拍照观察、脂肪细胞的培养观察等鉴定检测的实验;对于分离得到的脂肪干细胞在显微镜下进行细胞形态观察、cck-8法检测动力学生长曲线、对脂肪干细胞成脂诱导后进行特异性的油红O和台盼蓝复合染色实验、Hoechst荧光染色、流式细胞仪进行细胞表面抗原的检测。 通过以上的实验观察和检测,证明本实验收获的细胞确实为形态完整,功能健全的脂肪干细胞和脂肪细胞。 接下来把分离得到的人体吸脂来源的脂肪干细胞和脂肪细胞分别采用1:5,1:1,2:1和5:1四个比例,在Transwell中进行共培养。采用脂质染料油红O和细胞核染料台盼蓝对共培养后的脂肪干细胞进行染色,显微镜下拍照观察细胞形态,并计算成脂分化率。同时,通过混合成脂诱导方法诱导脂肪干细胞,并以此为成脂分化的阳性对照组,以不加任何诱导剂的普通培养基培养的脂肪干细胞为成脂分化的阴性对照组。结合共培养对照组,分析考察了本实验共培养条件下,各个不同细胞比例培养组之间,成脂诱导分化效果的差异。 实验结果证明:用脂肪干细胞与脂肪细胞的共培养这种方式,共培养8天内尚不能促使脂肪干细胞成脂分化。对于未能实现干细胞成脂分化的原因可能有如下两点:一是共培养时间过短所致。第二点原因则可能是单纯这种干细胞与脂肪细胞共培养方法并不能实现干细胞向成脂方向的分化。 鉴于以上第一点原因,本人将共培养时间延长至20天,并采用流式细胞仪分析共培养后脂肪干细胞表面抗原标记的表达。同时,对共培养后的脂肪干细胞进行了Hoechst和PI的死活荧光检测。 实验结果表明:经过20天共培养的脂肪干细胞仍未发生明显的成脂分化现象,但其表面抗原CD105的表达发生明显降低,这可能意味着脂肪干细胞经过共培养后发生了一定程度的分化。 本实验在脂肪干细胞成脂分化研究领域内,首次尝试了以利用脂肪干细胞与脂肪细胞二者间接共培养的方式进行脂肪干细胞的成脂诱导分化,并通过各种生物学检测手段对成脂分化共培养后的脂肪干细胞进行了分化效果的检验,对进一步研究脂肪干细胞的成脂诱导方法和机理具有指导意义。
【图文】:
图1.1组织再生_l:程系统示意图 F191.1TissueRegenerationSystemdiagram图1.1展示了再生组织工程具体实现的系统过程(图片来源于网络,网址为ims.Postech.ac.kr)。首先,模仿人体自然组织的结构,根据患者自身需要,利用计算机辅助设计出适合的组织工程支架,然后将种子细胞接种到支架材料上形成人工工程组织构建物,,当构建物体外培养至适宜的大小,满足植入条件后,便可将构建物植入体内,
引用中不可回避的难题[79一8’]。3脂肪细胞脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成,由疏松结缔组织分隔成小叶(如图1.2所示,图片来源于生物谷网站,网址为~.bioon.Com)。脂肪组织通常分为两类:第一类是黄(白)色脂肪组织(在某些哺乳动物呈白色),即通常所说的脂肪组织。它由大量单泡脂肪细胞集聚而成,细胞中央有一大脂滴,胞质呈薄层,位于细胞周缘,包绕脂滴。黄色脂肪组织主要分布在皮下、网膜和系膜等处,约占成人体重的10%,是体内最大的贮能库。参与能量代谢,并具有产生热量、维持体温、缓冲保护和支持填充等作用。第二类是棕色脂肪组织呈棕色,其特点是组织中有丰富的毛细血管,脂肪细胞内散在许多小脂滴
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329
本文编号:2522314
【图文】:
图1.1组织再生_l:程系统示意图 F191.1TissueRegenerationSystemdiagram图1.1展示了再生组织工程具体实现的系统过程(图片来源于网络,网址为ims.Postech.ac.kr)。首先,模仿人体自然组织的结构,根据患者自身需要,利用计算机辅助设计出适合的组织工程支架,然后将种子细胞接种到支架材料上形成人工工程组织构建物,,当构建物体外培养至适宜的大小,满足植入条件后,便可将构建物植入体内,
引用中不可回避的难题[79一8’]。3脂肪细胞脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成,由疏松结缔组织分隔成小叶(如图1.2所示,图片来源于生物谷网站,网址为~.bioon.Com)。脂肪组织通常分为两类:第一类是黄(白)色脂肪组织(在某些哺乳动物呈白色),即通常所说的脂肪组织。它由大量单泡脂肪细胞集聚而成,细胞中央有一大脂滴,胞质呈薄层,位于细胞周缘,包绕脂滴。黄色脂肪组织主要分布在皮下、网膜和系膜等处,约占成人体重的10%,是体内最大的贮能库。参与能量代谢,并具有产生热量、维持体温、缓冲保护和支持填充等作用。第二类是棕色脂肪组织呈棕色,其特点是组织中有丰富的毛细血管,脂肪细胞内散在许多小脂滴
【学位授予单位】:大连理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329
【引证文献】
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本文编号:2522314
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