重配制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株

发布时间：2019-08-14 08:17

【摘要】： 流行性感冒是由流感病毒(influenza virus)感染引起的一种呼吸道疾病,能感染人和多种动物,其特点是短期突然爆发,迅速流行,并具有广泛的破坏性。目前防治流感的最有效方法是接种流感疫苗。市面上所用的流感疫苗是以鸡胚为基质生产的灭活疫苗。使用鸡胚生产流感疫苗存在许多需要改进的方面,比如不利于应对大规模流感爆发等问题。限于鸡胚生产流感疫苗的局限性,开发细胞流感疫苗称为当务之急。Vero细胞是WHO积极推荐用于流感疫苗生产的细胞基质,能够利用生物反应器进行大规模培养,在流感疫苗生产上有着广阔的应用前景。但Vero细胞不是流感病毒的天然易感细胞,因此获得流感病毒Vero细胞高产适应株对于流感疫苗的生产具有重要意义。本实验利用传统的流感病毒重配方法,制备Vero细胞适应性高产的H1N1流感病毒株,试图解决以Vero细胞为基质制备流感疫苗病毒产量低等瓶颈问题。以流感病毒Vero细胞适应株A/yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株与WHO推荐的2007-2008年度北半球流感疫苗生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF鸡胚和Vero细胞,重配病毒用抗A/yunnan/1/2005Va(H3N2)抗体筛选,在Vero细胞连续传代12代,血凝抑制试验、免疫荧光、琼脂扩散试验表明重配病毒为H1N1;RT-PCR扩增后基因序列分析证明含有A/Caledonia/20/99(H1N1)的HA和NA。将重配病毒在Vero细胞上大量培养,经甲醛灭活,制备灭活疫苗,免疫动物观察其免疫原性。结果表明:获得了一株Vero细胞适应性的高产的H1N1流感病毒株,免疫原性与重配前的毒株没有显著性差异。通过流感病毒Vero细胞适应株与流行株的重配和抗体筛选,可以获得流行株流感病毒Vero细胞适应株。
【图文】：

序列,NA序列,序列,心洲

证明其亚型确实为HINI，其HA序列与习Caledonl暇侧99〔HINI)的HA序列完全相同，Maxident为1的%。NA序列与川Caledoul暇0/99(HINI)的NA序列相比仅216位一个碱基的差别，其相似性结果见图6和图7和图8。图‘.HA的序列在NCBI上BL铭T后结果 Rg6J七 eresultof11Asequeneea饭 rBLASTontheNCBI钟毗翻娜如询，妙i团t吐妙.切:险比地妞昌协即比沈抽必)麟.姚哄姚吼叭叭吼叭然吼叭姚姚叭叭热姚憋吼幼勃叨叨劲叻叻叻幼幼叻叻助咖叻叻助知0.0叻溅眼叭溅眠眼溅溅呱溅溅溅溅溅溅眠鹏眠鹏溅一洲洲洲蹦蹦渊附麒附粼蒯娜魏瀚朋洲泌朋泌姗一丝塑塑丝洲一一一一泌那珊一珊塑一姗溯l腺l鲤堡些鲤些丝塑}丝迎迷浑巡彭}夔!丝址}旦巡叁}迷遨坠退1巡卫西退}旦塑邀‘例塑矍醚l雨抽流能例物以向的咖}衬以娜扮俪哪!而栖A毗阁肠的她锄娜洲)}洲耐衣。二1而油八髓阁俪的网瞰洲阴协卿耐4袱】血翔人附例腼幽目勿璐批肛)!!抓叻腼l而抽4柑例俪流树卿l洲绷1))腼喇断n1而抽A能闪腼的网脚侧l}}恤刚咖扭I雨姻人能(确日黝侧卸呀均州绷In娜俄41’1雨.人毗潮.汤侧目】田1，，蝴m1)}物例毛渝她碑附佣俪创1班刚川ID加姗咖而网1雨抽A毗随耐网叨料月叫】娜侧谧4，蒯… 11翻厄人毗(叭刚己心洲酬甩月1}!蜘时气咖比1雨她A皿蜘喇.耐浏洲出川物时毛咖山l而烟盛皿俩枷闷1习酬附徽})姗以毛四咖l血翔盛秘闪树咖喇喇出川物翻4，咖曲喻翻.人腿{珊翻蒯2引训H洲}黝耐气溯晓l面翔典皿}习柑甄蒯万绷姗”洲m以气枷海l胡谓.A髓姗蜘阔酬灿晰彻喊4，咖海1确脚.A毗沁咐幽南娜2叫洲叫}翎帅以气耐1雨翻A毗闪训咖tyil叫酬川功卿邝以峨训I涌峪如A撇例汤臼成的州到圳棍脚锄献4，墨黔置俪一巡﨏继一﨑一﨑一﨑一
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R392

【参考文献】