高糖与尼古丁对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及机制研究

发布时间：2019-08-26 20:25

【摘要】：目的:研究高糖对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10-50 mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平;荧光定量PCR检测高糖对凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表达的影响。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微术、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降;与高糖组相比,抗氧化剂组LDH、MDA含量明显下降,SOD含量显著上升;抗氧化剂组LDH、MDA、SOD的含量较对照组无明显变化;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降;荧光定量PCR结果表明高糖能上调P53、Msx1基因的表达,下调Pax3、Bmp4、Slug基因的表达。结论:高糖可能通过氧化应激和改变凋亡相关基因的表达从而诱导心肌细胞凋亡。 目的:研究尼古丁对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用0.1-100μM终浓度的尼古丁进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、尼古丁组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平;荧光定量PCR检测尼古丁对凋亡相关基因P53、Bax、Bcl-2、Pax3、Bmp4、Slug和Msx1表达的影响。结果:MTT结果显示尼古丁能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微术、TUNEL染色和流式细胞术均表明尼古丁能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,尼古丁组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降;与尼古丁组相比,抗氧化剂组LDH、MDA含量明显下降,SOD含量显著上升;抗氧化剂组LDH、MDA、SOD的含量较对照组无明显变化;流式细胞检测显示尼古丁组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较尼古丁组则显著下降;荧光定量PCR结果表明尼古丁能上调P53、Bax和Msx1基因的表达,下调Bcl-2、Pax3、Bmp4和Slug基因的表达。结论:尼古丁可能通过氧化应激和改变凋亡相关基因的表达诱导心肌细胞凋亡。
【图文】：

图 1 培养 72h 后的心肌细胞形态（×400）度葡萄糖对心肌细胞生长活力的影响显示，10 mmol/ L浓度组与对照组间的细胞活力无统L浓度组的细胞活力较对照组明显下降(P < 0.01)，且选取最低有效浓度 20 mmol/L作为葡萄糖实验浓度。不同浓度葡萄糖对心肌细胞生长活力的影响 (x ±s, 葡萄糖浓度(mmol/L) A 值 P 值0.506±0.01610 0.502±0.015 0.23620 0.461±0.011* 0.000

南京医科大学硕士学位论文三、激光共聚焦显微镜观察心肌细胞凋亡细胞爬片经 Annexin V/PI 双染后置于激光共聚焦显微镜下观察。高糖组可见明显的细胞凋亡，早期凋亡细胞膜呈绿色荧光,细胞核不着色；中晚期凋亡细胞膜呈绿色荧光,细胞核呈红色荧光。对照组为正常细胞，，仅发出微弱的绿色荧光（图 2）。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：2529531