虎杖苷联合生长因子诱导人脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

发布时间：2019-09-16 22:44

【摘要】：目的:探讨虎杖苷联合生长因子诱导人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)向神经元样细胞分化的过程。方法:采用原代组织贴壁法,体外分离培养h UC-MSC,流式细胞术鉴定h UC-MSC表面标志物。不同剂量虎杖苷联合生长因子诱导后显微镜下观察细胞形态变化,应用荧光定量PCR方法检测神经元特异性标志物3型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)、微管相关蛋白2(MAP2)和孤束核受体相关因子1(Nurr1)的表达,细胞免疫荧光技术检测β-tubulin-Ⅲ的蛋白表达。结果:h UC-MSC高表达CD29、CD44、CD105,极低表达CD14、CD34、CD45、HLA-DR。诱导后部分h UC-MSC分化为典型的神经元样细胞,并且β-tubulin-Ⅲ、MAP2基因表达经诱导后显著上调。Nurr1 m RNA仅在高剂量虎杖苷联合生长因子组显著上调。不同剂量虎杖苷联合生长因子组均有部分细胞表达β-tubulin-Ⅲ,对照组几乎不表达。结论:虎杖苷能够诱导h UC-MSC分化为神经元样细胞,且存在剂量依赖性,为h UC-MSC移植治疗神经系统疾病提供了实验依据。
【图文】：

286中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年1月第30卷第1期CJTCMP,January2015,Vol.30,No.1（4.79％），见图2。其中CD29、CD44、CD105是基质细胞相关表面标记，HLA-DR是人类白细胞抗原，CD34和CD45是造空干细胞标志物。AAB图1hUC-MSC细胞形态观察（×100）注：A.原代培养4周的hUC-MSC；B.培养的第3代hUC-MSC。图2hUC-MSC表面标志物鉴定3.hUC-MSC向神经元样细胞定向诱导分化3.1形态学观察诱导14d，虎杖苷联合生长因子诱导组可见大部分细胞呈现神经元样细胞形态改变，胞质向核收缩，胞体变圆变亮，折光性增强，突起变细增多，末端出现分叉（图3A-图3B）。生长因子诱导组仅见少量细胞立体感增强的细胞，呈简单的双极，细胞密度高于加入虎杖苷诱导的两组细胞（图3C），对照组形态学未见明显改变（图3D）。图3hUC-MSC诱导前后细胞形态学变化（×200）注：A.低剂量虎杖苷联合生长因子诱导组；B.高剂量虎杖苷联合生长因子诱导组；C.生长因子诱导组；D.对照组。CDAB3.2定量PCR鉴定分化细胞见图4。与对照组比较，hUC-MSC经诱导后，β-tubulin-ⅢmRNA的表达在高剂量和低剂量虎杖苷联合生长因子组分别上调了7.44倍和7.98倍（P<0.05），在单纯生长因子诱导组上调了2.22倍（P<0.05），且联合使用虎杖苷后β-tubulin-Ⅲ的表达较单纯生长因子诱导显著增加（P<0.05）。MAP2基因表达在高剂量虎杖苷联合生长因子组增加了18.14倍（P<0.05），在低剂量虎杖苷联合生长因子组增加了6.68倍（P<0.05），在单纯生长因子诱导组增加了6.20倍（P<0.05）。与生长因子诱导组比较，Nurr1mRNA在高剂量虎杖苷联合生长因子组显著上调，为对照组的2.37倍（P<0.05）。3.3细胞免疫荧光染色鉴定分化细胞β-tubulin-Ⅲ主要定位于胞浆。低剂量和高剂量虎杖苷联合生长

286中华中医药杂志(原中国医药学报)2015年1月第30卷第1期CJTCMP,January2015,Vol.30,No.1（4.79％），见图2。其中CD29、CD44、CD105是基质细胞相关表面标记，HLA-DR是人类白细胞抗原，CD34和CD45是造空干细胞标志物。AAB图1hUC-MSC细胞形态观察（×100）注：A.原代培养4周的hUC-MSC；B.培养的第3代hUC-MSC。图2hUC-MSC表面标志物鉴定3.hUC-MSC向神经元样细胞定向诱导分化3.1形态学观察诱导14d，虎杖苷联合生长因子诱导组可见大部分细胞呈现神经元样细胞形态改变，胞质向核收缩，胞体变圆变亮，折光性增强，突起变细增多，末端出现分叉（图3A-图3B）。生长因子诱导组仅见少量细胞立体感增强的细胞，呈简单的双极，细胞密度高于加入虎杖苷诱导的两组细胞（图3C），对照组形态学未见明显改变（图3D）。图3hUC-MSC诱导前后细胞形态学变化（×200）注：A.低剂量虎杖苷联合生长因子诱导组；B.高剂量虎杖苷联合生长因子诱导组；C.生长因子诱导组；D.对照组。CDAB3.2定量PCR鉴定分化细胞见图4。与对照组比较，hUC-MSC经诱导后，β-tubulin-ⅢmRNA的表达在高剂量和低剂量虎杖苷联合生长因子组分别上调了7.44倍和7.98倍（P<0.05），在单纯生长因子诱导组上调了2.22倍（P<0.05），且联合使用虎杖苷后β-tubulin-Ⅲ的表达较单纯生长因子诱导显著增加（P<0.05）。MAP2基因表达在高剂量虎杖苷联合生长因子组增加了18.14倍（P<0.05），在低剂量虎杖苷联合生长因子组增加了6.68倍（P<0.05），，在单纯生长因子诱导组增加了6.20倍（P<0.05）。与生长因子诱导组比较，Nurr1mRNA在高剂量虎杖苷联合生长因子组显著上调，为对照组的2.37倍（P<0.05）。3.3细胞免疫荧光染色鉴定分化细胞β-tubulin-Ⅲ主要定位于胞浆。低剂量和高剂量虎杖苷联合生长
【作者单位】： 嘉兴市第二医院;浙江省安吉县人民医院;
【基金】：浙江省中医药科学研究基金项目(No.2011ZA104) 国家自然青年科学基金项目(No.811010707) 嘉兴科技局项目(No.2012AY1071-2)~~
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2536466