1-甲基色氨酸增强免疫治疗在小鼠胰腺癌模型中抗肿瘤作用的机制探讨

发布时间：2019-09-17 09:43

【摘要】： 目的： 1.研究胰腺癌细胞株Panc02在γ干扰素(IFN-γ)作用下吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达及活性的变化以及1-甲基色氨酸(1-MT)对IDO活性的影响。 2.观察在利用Panc02细胞株建立的胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表达以及调节性T细胞(Treg)数量和功能的变化。 3.观察在树突状细胞(DC)疫苗对胰腺癌荷瘤鼠中IDO的表达以及Treg数量和功能的影响。 4.研究抑制IDO的活性后胰腺癌荷瘤鼠中Treg数量的变化以及对树突状细胞(DC)疫苗抗肿瘤作用的影响。 方法： 1.分别用不同浓度(0、10、20、50U／ml)的IFN-γ诱导刺激胰腺癌细胞株Panc02, Western Blot检测各组Panc02中IDO蛋白表达水平的变化。高压液相测定培养液中犬尿氨酸浓度评价IDO分子活性。 2.建立小鼠胰腺癌模型,Western Blot检测荷瘤鼠肿瘤组织周围引流淋巴结(TDLNs)中IDO蛋白表达水平相对于正常对照组的变化。利用流式细胞术检测荷瘤鼠应用1-MT前后TDLNs及脾脏中CD4+CD25+T细胞占CD4+T比例；荧光定量PCR测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平。 3.利用肿瘤细胞裂解物冲击DC制备DC疫苗,并根据是否与1-MT联合应用分组,观测1-MT对免疫治疗在小鼠胰腺癌模型中抗肿瘤作用的影响,并测定TDLNs中IDO表达水平,同时研究TDLNs及脾脏中CD4+CD25+T细胞占CD4+T比例以及Foxp3 mRNA水平的变化。 结果： 1. Panc02中的IDO蛋白的相对表达量随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增高,同时活性增强,而1-MT可以有效抑制IDO的活性。 2.胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO蛋白表达水平高于正常对照组。差异有统计学意义(p0.05)。 3.荷瘤鼠TDLNs和脾脏中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例明显高于正常对照鼠,同时Foxp3 mRNA表达水平显著提高。 4.应用1-MT后,可以显著降低荷瘤鼠TDLNs和脾脏中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例。 5.接受DC疫苗治疗的胰腺癌荷瘤鼠TDLNs中IDO表达增高,同时TDLNs和脾脏中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例及Foxp3 mRNA表达水平显著提高。 6.1-MT+与DC疫苗联合应用组肿瘤生长显著受到抑制,抗肿瘤作用显著高于DC疫苗组及1-MT组。 结论： 1.胰腺癌细胞株Panc02本身表达IDO,在IFN-γ诱导下表达上调且活性增强,这可能是引起TDLNs及脾脏CD4+CD25+Treg细胞的数量增加的重要因素之一。 2.胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结IDO表达明显增高,且TDLNs及脾脏CD4+CD25+Treg细胞的数量增加,这可能是影响胰腺癌免疫治疗的重要因素。 3.通过抑制IDO活性,1-MT可以有效抑制胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结及脾脏CD4+CD25+Treg细胞的数量增加,从而增强DC疫苗抗肿瘤作用。
【图文】：

细胞共培养24小时。PancOZ细胞组加入等量PBS。取培养液上清测定犬尿氨酸浓度每组样本例数均为6例。3结果3.1IFN一Y诱导胰腺癌细胞株Panc02中IDo的表达增强IDO、p一actin特异性免疫印迹条带的相对分子质量分别为42KD和43KD。不浓度IF’N一丫诱导Panc02的IDO蛋白表达量如表1及图1、2所示。经过分析可知，组的IDO/p一actin值之间差别具有统计学意义(F=21.416，P<0.001)，可以认为四组ID蛋白的表达量存在差别，进一步采用LSD的方法进行两两比较，比较结果显示，10U/ml组与20U/ml组差别无统计学意义(P=0.238)之外，其余各组间都存在差(P均小于0.05)。与空白对照组比较，IFN一Y作用后胰腺癌细胞株Panc02的IDO白表达量明显增加，且随着IFN一Y作用浓度的增大其IDO的表达量逐渐增加，，50U/ml组为著。

A:OUIml组B:10Ulml组C:20U/ml组D:50U/ml组
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

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本文编号：2536786