兔脂肪干细胞的分离培养及诱导分化的实验研究

发布时间：2019-09-17 16:00

【摘要】：目的:进行兔ADSCs的分离、体外培养,并观察ADSCs的体外生长的特性及多向分化潜能,为骨组织工程的进一步研究做准备。方法:将取得的脂肪组织充分剪碎,消化、离心后,将细胞悬液置于培养皿中,在培养箱中培养,获得原代细胞,并进行传代培养,观察体外增殖能力。选取第3代细胞,进行成脂诱导,进行油红O染色。选取第3代ADSCs,加入成骨诱导培养基,并设置加入基础培养基的为阴性对照,进行ALP、茜素红、Von Kossa染色。通过免疫荧光和RT-PCR检测ALP、OPN、OCN和ONN的表达。结果:脂肪干细胞接种24h后,可见少数较大的细胞开始贴壁,为大而扁平的单层细胞。48h后大多数细胞贴壁,呈梭形,有粗大突起。5-7天后,细胞逐渐分裂、融合成单层。传代后细胞呈梭形,核居中。细胞生长曲线示在第3～7天细胞进入快速增殖期。成脂诱导后,油红O染色证实细胞内有脂滴形成。成骨诱导后进行ALP、茜素红、Von Kossa染色结果均为阳性,通过免疫荧光和RT-PCR检测,ALP、OPN、OCN和ONN均有表达。结论:利用原代细胞培养技术可成功地从兔脂肪组织中分离出目的细胞,并进行体外培养及传代。在诱导培养基作用下兔脂肪干细胞可分化为成骨细胞及成脂肪细胞。
【图文】：

细胞,梭形,贴壁细胞,纤维细胞

b. 加适当体积的 0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶解 RNA，保存于-80oC 冰。结果ADSCs 镜下形态观察细胞接种时，含有较多的脂滴、少量红细胞和成纤维细胞等杂质，接种约4肪干细胞开始贴壁，随着细胞贴壁后培养时间的延长，换液次数的增加，这细胞可以基本被清除。接种 24h 后，可见多数的细胞开始贴壁，倒置显微镜壁的细胞呈圆形、椭圆形或梭形，为大而扁平的单层细胞。有的细胞体细长纤维细胞。48h 后贴壁细胞增多，贴壁细胞形态多样、分布不均，部分呈巢，细胞向四周伸展，边缘的细胞呈梭形，散在生长的细胞呈椭圆形或梭形，的细胞个体较大，胞质中颗粒明显，并开始伸展，分裂，呈梭形，有粗大突7 天后，细胞逐渐分裂、融合成单层，成簇分布。传代后细胞呈梭形，细胞纤维细胞样生长。（见图 1~图 5 倒置相差显微镜下对 ADSCs 的形态观察）

细胞,梭形,贴壁细胞,纤维细胞

b. 加适当体积的 0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶解 RNA，保存于-80oC 冰。结果ADSCs 镜下形态观察细胞接种时，含有较多的脂滴、少量红细胞和成纤维细胞等杂质，，接种约4肪干细胞开始贴壁，随着细胞贴壁后培养时间的延长，换液次数的增加，这细胞可以基本被清除。接种 24h 后，可见多数的细胞开始贴壁，倒置显微镜壁的细胞呈圆形、椭圆形或梭形，为大而扁平的单层细胞。有的细胞体细长纤维细胞。48h 后贴壁细胞增多，贴壁细胞形态多样、分布不均，部分呈巢，细胞向四周伸展，边缘的细胞呈梭形，散在生长的细胞呈椭圆形或梭形，的细胞个体较大，胞质中颗粒明显，并开始伸展，分裂，呈梭形，有粗大突7 天后，细胞逐渐分裂、融合成单层，成簇分布。传代后细胞呈梭形，细胞纤维细胞样生长。（见图 1~图 5 倒置相差显微镜下对 ADSCs 的形态观察）
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

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