B1-a细胞和B2细胞二者在发育和分化方面的相关性的研究

发布时间：2019-09-29 21:18

【摘要】： 目的 根据细B胞的发育来源,可将B淋巴细胞分为两个亚群,B1细胞和B2细胞。根据能否表达CD5分子,B1细胞又分为B1-a细胞(CD5+)和B1-b细胞(CD5-)。B1细胞是由早期的前体细胞发育而来,在胚胎期及出生后分布于脾脏,成年后主要定位于腹膜、胸膜大网膜及扁桃体等处,在外周血和淋巴器官中较少见,几乎不依赖于骨髓来源,是一类具有重要功能,可以自我更新的长寿细胞。研究发现,B1细胞与B2细胞在起源、分化、表面标志及其基因表达等方面存在很大差异,尤其是二者在起源和具体发育分化过程中的关系存在很大争议。目前的研究主要有以下观点：①B细胞是在祖B细胞阶段就已经分为不同的谱系,然而该研究中的祖B细胞分别来源于胚胎肝脏和成年骨髓,而二者在时间和空间上已经存在了差异,也就是说B细胞的发育过程中可能于所处的微环境有一定的关系；②B细胞在发育后期由于某种信号介导而导致向不同的方向分化,但在祖细胞阶段还是属于同一个谱系。那么给予B1细胞一定的信号或者提供相应B2细胞发育所需要的干预因素,在这种情况下B1细胞能否向B2细胞分化需要我们近一步探讨；③在一定的条件下B1细胞可以由成熟的B2细胞发育而来。然而B1细胞相对于B2细胞出现较早,有研究表明产生于妊娠8.5～9.0天的主动脉旁的脏壁层(PAS)的B细胞的表型为CD5+CD45RlowsIgMhi,这一表型即所谓的B1-a细胞,而不是B1-b细胞或者B2细胞。因此,我们认为B细胞发育的第一波峰为B1-a细胞。依照物种进化的观点,如果B2细胞分化为B1细胞属于返祖的个别现象。那么,B1细胞有没有可能在一定的条件下分化为B2细胞有待于我们进一步研究。 本实验通过建立骨髓体外微环境,对采用流式细胞仪分选纯化的B1-a细胞进行体外培养,在培养第2至6天进行流式检测。从而观察B1-a细胞能否分化为B2细胞。 方法 各取15只C57BL／1d新生鼠和2d新生鼠,分别从脾脏中提取淋巴细胞,将提取的淋巴细胞采用抗小鼠IgM-(APC)和抗CD5-(PE-CY5)的荧光抗体标记,用流式细胞仪分选出B-1a细胞。把分选好的B-1a细胞标记CFSE,置于体外骨髓微环境中培养,将培养第2天至第6天的细胞再次标记抗IgD-(PE)的荧光抗体,并通过FACS检测,观察B1-a细胞能否分化为B2细胞。 结果 新生鼠／1d较新生鼠／2d,B1-a细胞分化为B2细胞的相对分化率较高,其分化率分别为52.93±1.93%(1d)和26.98±2.94%(2d),有显著统计学差异(P0.01)。 讨论 B1细胞在胚胎发育期达到高峰,成年后明显下降。因此,选择新生鼠的脾脏,提取淋巴细胞,再通过流式细胞仪分选纯化B1-a细胞,进行CFSE标记后转入体外骨髓微环境进行培养,对培养第2天至第6天的细胞再次标记抗IgD-(PE)的荧光抗体,并通过FACS检测,结果显示标记CFSE的B1-a细胞在第2天大部分分化为B2细胞。通过体外培养B1-a细胞可以分化为B2细胞,这可能是B细胞亚群分化的一个途径,B1-a细胞可能为B2细胞分化的过渡阶段。在此基础之上,应当继续完善有关体外或者体内实验体系,以便清楚准确地阐明B细胞的分化途径。 结论 1、通过体外培养新生鼠脾脏B1-a细胞可以分化为B2细胞,二者在分化和发育上有着很大的相关性。 2、新生鼠／1d较新生鼠／2d,B1-a细胞分化为B2细胞的分化率明显升高,有显著的统计学差异(P0.01)。
【图文】：

检测时间d图3，系列1，2分别代表新生鼠/ld和新生鼠/2d，CFSE(+)I叨(+)细胞百分比有下降趋势。Bl一转化为B一2细胞的相对比率(%)八岁，

本文编号：2544140