广西巴马县人群外周血白细胞端粒DNA长度的研究

发布时间：2019-10-18 08:58

【摘要】： 目的:探讨广西巴马县人群外周血白细胞端粒DNA长度随年龄变化的规律,分析该地区人群外周血白细胞端粒DNA长度随年龄增加而缩短的速度是否比非长寿地区人群缓慢,比较该地区人群外周血白细胞端粒DNA长度是否比非长寿地区人群外周血白细胞端粒DNA长度长,从而探索巴马长寿现象是否与端粒有关。方法:1、建立端粒DNA长度的检测方法:地高辛探针标记的Southern blot方法。2、收集49例广西巴马县健康人群(实验组)外周血样和51例广西非长寿地区健康人群(对照组)外周血样,将实验组与对照组按年龄分为四组,分别为:青年组(35岁),中年组(≥35岁,64岁),老年组(≥64岁,85),长寿组(≥85)。运用地高辛探针标记的Southern blot方法测量人群外周血白细胞端粒DNA限制性酶切片断(TRF)长度。3、使用统计软件SPSS13.0对实验数据进行分析。结果:1、优化地高辛探针标记的Southern blot方法,确定样品DNA最佳上样量为1.5μg,最佳酶切时间为2h。测量对照样品端粒DNA长度,结果分别为3.9Kb、10.2Kb。2、对实验组与对照组人群外周血白细胞端粒DNA长度与年龄作相关与回归分析,结果显示实验组与对照组年龄与外周血白细胞端粒DNA长度线性关系良好,两组的相关系数分别为-0.944与-0.942,回归方程分别为Y=11.888-0.044X、Y=11.141-0.045X (X为年龄,Y为端粒长度),比较两个方程的回归系数,t=0.32(P 0.05),差异无统计学意义。3、以年龄为协变量,对实验组和对照组外周血白细胞端粒DNA长度作协方差分析,差异有统计学意义(P 0.05),实验组与对照组端粒DNA长度不同,且实验组端粒DNA长度较长。4、对实验组和对照组内部各个年龄组外周血白细胞端粒DNA长度做方差分析,结果显示两组差异均有统计学意义(P 0.05),实验组和对照组内部各年龄组之间的端粒DNA长度均有差异,年龄越大的组别端粒DNA长度越短。5、对实验组与对照组之间不同年龄组外周血白细胞端粒DNA长度做t检验,结果显示除青年组的差异没有统计学意义(P 0.05),中年组、老年组、长寿组差异均有统计学意义(P 0.05),实验组人群端粒DNA长度在中年组、老年组、长寿组均比对照组人群端粒DNA长度长。6、对实验组与对照组内部不同性别端粒DNA长度进行比较,结果显示两组差异均无统计学意义(P 0.05),尚不能认为不同性别人群的外周血白细胞端粒DNA长度有差异。结论:1、广西巴马和广西非长寿地区人群的外周血白细胞端粒DNA长度均与年龄呈负相关,但尚不能认为两组人群外周血白细胞端粒DNA长度随年龄增大而缩短的速度不同。2、广西巴马人群外周血白细胞端粒DNA长度比广西非长寿地区人群外周血白细胞端粒DNA长度长。3、广西巴马和广西非长寿地区不同性别人群的外周血白细胞端粒DNA长度尚不能认为有差异。
【图文】：

流程图,端粒长度,流程图,总容积

图 1 端粒长度测定的流程图Fig. 1 Experimental scheme of the TeloTAGGG Telomere Length Assay.3.1 样品酶切将 DNA 样品在 4℃以 13000r/min 离心 5min，放置于冰上待用。取 inf I 和 6μl Rsa I 酶充分混合，放置于冰上待用。每个 DNA 样品取合适度，用 nuclease-free water 加至总容积 17μl。取 10μl control-DNA low0μl control-DNA high，，分别加入 7μl 的 nuclease-free water 至总容积 17μ有的样品和对照均加入 2μl digestion buffer 和 1μl 混合酶，12000r/min 10s。37℃水浴孵育合适的时间。每管各加入 4μl loading buffer2000r/min 离心 10s。以上所有步骤均在冰上进行。.3.2 电泳

扫描图,加样,端粒DNA,端粒

20样品不同加样量端粒 DNA 长度测定结果的miluminescent detection of TRF in different c：1、1.0μg; 2、1.5μg; 3、2.0μg; M、Mark切时间端粒 DNA 长度测量结果如、2h、12h，当酶切时间为 1h，时间为 2h 时，其所得谱带更加其所得谱带与酶切时间为 2h 的择酶切时间为 2h 最佳。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R346

【参考文献】