旋毛虫早期识别性单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2019-10-18 09:45

【摘要】： 旋毛虫病是由旋毛虫(Trichinella spiralis)引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,可感染人及150多种动物,在我国该病仍有发生,不仅给畜牧业生产和肉品工业造成巨大的经济损失,而且严重威胁着人民群众的身体健康。旋毛虫病的临床表现症状一般不具典型特征,临床诊断较为困难,易与其他传染病相混淆。虽然肌肉活检发现幼虫或包囊虽可确诊,但在轻度感染早期往往不易检出,即使是感染晚期,因组织局限性的影响,活检阳性率也只有50%左右,且不易被人们接受。为此,寻找一种特异性强、敏感性高的诊断方法对旋毛虫病的防治具有重要意义。免疫学方法ELISA是目前最为敏感的方法,其敏感性可检测至每克肉0.01条虫体即每公斤肉含虫量少于10条,这一敏感性可完全确保肉类的安全,然而实验表明,用旋毛虫肌幼虫ES抗原为诊断抗原检测血清中抗旋毛虫抗体在感染2周后才可检出,而循环抗原(CAg)即排泄分泌(ES)抗原在最初几天就可检测到。因此,检测CAg是解决旋毛虫病早期诊断一个很有效的方法。为实现旋毛虫病的早期诊断,我们选用旋毛虫新生幼虫ES抗原作为筛选抗原,通过反复攻虫的免疫方法和单克隆抗体的制备技术获得了三株抗旋毛虫新生幼虫ES的单克隆抗体。通过免疫荧光实验我们发现这三株单克隆抗体可以与新生幼虫裸虫及感染早期的旋毛虫发生反应。证明我们所制备的单克隆抗体可以用于旋毛虫病的早期诊断。此外,我们还用所制备的单克隆抗体建立了旋毛虫病早期诊断双抗体夹心ELISA方法,为建立检测旋毛虫CAg早期诊断旋毛虫病的诊断试剂盒和试纸条奠定了基础。
【图文】：

体的杂交瘤细胞3株，分别命名为TS-C6G7、TS-H6C3和TS-C4F3。每株细胞的每代克隆均冻存2~4支，其它细胞株在克隆过程中因抗体分泌能力减弱或丧失而弃去，克隆结果见表2.4，部分克隆细胞见图2.1：表 2.4 杂交瘤细胞克隆结果Tab.2.4 Results of hybridoma cells cloning杂交瘤细胞克隆过程细胞培养上清抗体检测结果见表 2.5，随着克隆代数的增加，细胞培养上清抗体的 OD490值逐步升高。杂交瘤细胞株及克隆结果克隆次数TS-C6G7 TS-H6C3 TS-C4F3单克隆率 阳性率 单克隆率 阳性率 单克隆率 阳性率第 1 次克隆50%(48/96)62.5%(30/48)44.8%(43/96)46.5%(20/43)52.1%(50/96)50%(25/50)第 2 次克隆36.5%(35/96)80%(28/35)34.3%(33/96)66.7%(22/33)38.5%(37/96)51.3%(19/37)第 3 次克隆53.1%(51/96)100%(51/51)63.5%(61/96)100%(61/61)56.2%(54/96)100%(54/54)

图 2.2 杂交瘤细胞染色体核型鉴定(1000×)Fig 2.2 Chromosomes configuration of hybridoma cellsA: TS-C6G7 (107 条); B:TS-H6C3 (97 条); C: TS-C4F3 (103 条)2.2.4.2 单抗亚类鉴定结果2.2.4.2.1 ELISA 鉴定结果用 Sigma 公司的单抗亚类鉴定试剂盒对 TS-C6G7、TS-H6C3、TS-C4F3 三株单抗进行亚类鉴定，，结果见表 2.7。TS-C6G7为IgG2b，TS-H6C3为 IgG2a；TS-C4F3为 IgG1 类。表 2.7 单克隆抗体亚类鉴定（ELISA）Tab. 2.7 Subtype of monoclonal antibodies单克隆抗单 克 隆 抗 体 亚 类体类型 IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM IgATS-C6G7 1.028 1.447 2.382 1.113 0.981 0.887TS-H6C3 1.006 1.559 0.827 0.834 0.601 1.102
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

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本文编号：2551027