CD40L刺激的树突细胞增强CEA转基因小鼠细胞免疫的实验研究

发布时间：2019-10-29 03:39

【摘要】： 目的: 胃肠道恶性肿瘤是人类最常见的恶性肿瘤。在目前以手术切除为主的综合治疗中,辅助治疗由于其治疗模式的非特异性特点,常难以达到理想的效果。树突细胞(Dendritic Cell,DC)肿瘤疫苗是近年来兴起的一个免疫治疗新方法。CD40配体(CD40ligand,CD40L)在体内是T细胞激活DC功能的重要分子。本实验旨在通过外源性的CD40L刺激DC,促进其分化成熟,增强CEA转基因小鼠的细胞免疫,探讨在CEA转基因小鼠中,CD40L激活的DC诱导细胞免疫的有效性,为进一步进行肿瘤疫苗的细胞毒性试验和动物体内试验奠定基础。 材料与方法: 使用CEA转基因小鼠的骨髓细胞,通过粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)在体外的刺激,贴壁法定向诱导分化出未成熟DC,利用CD40L刺激未成熟DC后,体外荷载CEA_(526-533)抗原肽,使DC具备诱导特异性细胞免疫的能力。通过定量测定DC表面分子、DC分泌的细胞因子、淋巴细胞增殖试验等来研究此方法激活DC诱导细胞免疫的有效性。 结果: 1、实验组DC表面各类分子的表达均高于对照组。 2、实验组DC分泌的IL-12量显著高于对照组(P＜0.01)。 3、实验组DC刺激的CD8~+T细胞增殖多于对照组(P＜0.05),其分泌的INF-γ量显著高于对照组(P＜0.01)。 4、实验组DC刺激的脾细胞增殖显著多于对照组(P＜0.01),其分泌的INF-γ量显著高于对照组(P＜0.01)。 结论: 在CEA转基因小鼠的动物模型中,体外使用CD40L刺激骨髓来源DC可以促进其分化成熟,该成熟DC能有效增强CEA转基因小鼠的细胞免疫。
【图文】：

第一批子代小鼠DNAPCR扩增产物

复I」_人学硕卜赞位论文图3第三批子代小鼠 DNAPCR扩增产物注:图1至图3中M为标准品，1一7泳道分别为一只小鼠的PCR扩增产物。根据以上PCR结果，所鉴定的C57BL/6一CEA小鼠组织DNA均可扩增出92Obp的条带。因此实验所使用的C57BL/6一CEA小鼠均稳定携带人CEA基因，是本实验设计中理想的动物模型。以上显示三批共21只小鼠的鉴定结果，本实验中所使用的小鼠均取自这三批小鼠。二、C57BL/6一CEA小鼠骨髓来源DC免疫表型的鉴定流式细胞仪对各组DC表面分子鉴定结果见图4:(一)、 NoCD4OL组的DC表面分子表达分别为 CDlle7.61%， CD401.52%，CDSO138%，， CD8610.81%
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R392

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本文编号：2553359