一种简单的原代神经元培养及转染方法

发布时间：2019-11-04 08:02

【摘要】：目的建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法。方法无菌条件下分离生后2 d内SD大鼠海马,经消化、反复沉淀后获得海马组织细胞悬液,利用差速贴壁法对神经元进行纯化,采用神经元专用无血清培基进行培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化,采用微管相关蛋白(MAP2)抗体对细胞进行鉴定;利用慢病毒转染神经元,观察神经元转染效率。结果体外培养的原代神经元,在培养第10~15天可以形成密集的神经元网络,细胞健壮,神经元特征明显;经MAP2鉴定,神经元纯度达95%以上;利用慢病毒转染神经元,转染效率达95%以上。结论采用该方法进行原代神经元培养,能够获得高纯度的原代神经元;慢病毒是神经元转染的理想载体。

【参考文献】

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1 王秀力;陈东;刘佳梅;;NGF诱导PC12细胞向神经元的分化[J];吉林大学学报(医学版);2007年05期

2 郭琴;毛萌;罗小丽;孙小妹;李胜富;周晖;;神经元原代培养方法的改进[J];华西医学;2007年03期

3 尹金宝;常全忠;韩宇东;;新生大鼠离体海马神经元原代培养方法及鉴定[J];神经解剖学杂志;2012年06期

4 马巍;吴学元;陈炜;刘广宇;;慢病毒转染造血干细胞介导的肿瘤基因治疗的研究进展[J];现代肿瘤医学;2006年06期

5 张艳君;贾秀红;李建厂;徐酉华;;病毒及非病毒载体对U937单核细胞的转染效果[J];重庆医科大学学报;2013年02期

【共引文献】

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1 姜茜;姜玉武;王静敏;秦炯;吴希如;;一种改进的大鼠皮层神经元原代培养方法及其性质鉴定[J];北京大学学报(医学版);2009年02期

2 郭慧;马娇;童煜;屈艺;母得志;毛萌;;三种方法建立神经元与星形胶质细胞共培养模型的对比研究[J];中国当代儿科杂志;2010年12期

3 王旭辉;张岫竹;王伍超;刘大维;代维;周继红;;大鼠下丘脑神经元培养的新方法[J];第三军医大学学报;2009年17期

4 杨于力;罗清礼;吕红彬;;脂质体包裹人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒的构建[J];国际眼科杂志;2014年12期

5 李昕;王建平;刘春岭;李楠;白宏英;;雌二醇对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经生长因子蛋白表达的影响[J];郑州大学学报(医学版);2008年04期

6 刘晓丹;邓常清;;黄芪甲苷和三七总皂苷中主要有效成分抗PC12细胞氧化损伤的配伍研究[J];湖南中医药大学学报;2012年01期

7 彭涛;刘英辉;陈绍宏;张晓云;;人参皂甙Rg1对原代培养胎鼠脑神经细胞存活和可塑性的影响[J];华西医学;2008年01期

8 黄四云;胡成平;潘频华;;神经生长因子诱导PC12细胞一氧化氮合酶和P物质表达及干扰素调节因子1的作用[J];内科理论与实践;2011年02期

9 李丹晖;宋坪;张文生;;人参皂苷Rg1对UVB损伤PG12及成纤维细胞的保护作用[J];皮肤病与性病;2009年04期

10 周丽娜;叶文博;;野木瓜注射液对小鼠皮层神经细胞的抗氧化保护作用[J];上海师范大学学报(自然科学版);2011年01期

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1 侯君;CART对2型糖尿病大鼠下丘脑及胰岛β细胞的作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年

2 李鹏;模拟脑内移植环境追踪间充质干细胞移植功能重建体外实验研究[D];南方医科大学;2013年

3 酉建;Tenascin-R多克隆抗体的制备及其被动免疫治疗大鼠脊髓损伤的实验研究[D];南方医科大学;2013年

4 甘娜;MRP8和IL-1β与内侧颞叶癫痫的关系和分子机制研究[D];中南大学;2014年

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1 宋士娜;靶向干扰五种基因对PC12细胞增殖的影响[D];昆明医学院;2011年

2 周丽娜;野木瓜注射液及野木瓜提取物对H_2O_2氧化损伤神经元的保护作用[D];上海师范大学;2011年

3 张洋;调节神经突起生长中草药的筛选及其活性物质的分离、纯化与结构鉴定[D];四川农业大学;2011年

4 李卉;中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒神经生长因子对PC12细胞阿片受体表达的影响[D];重庆师范大学;2008年

5 杨慧娟;大鼠脊髓全横断后miR-124表达变化及其对培养细胞靶蛋白的影响和作用机制研究[D];昆明医学院;2009年

6 尹天泉;胃癌分化程度与神经分布相关性及胃癌细胞与神经细胞相互作用的研究[D];第四军医大学;2009年

7 顾鹏毅;牛脑海马NGF的分离纯化、鉴定及微量元素的测定[D];中国医科大学;2009年

8 王旭辉;大剂量GC对下丘脑神经元[Ca~(2+)]_i的影响及其机制研究[D];第三军医大学;2009年

9 高选;hESC生物药物建立及GM-1对hESC诱导分化神经细胞的影响[D];山东大学;2010年

10 黄玲芳;改构型酸性成纤维细胞生长因子对顺铂所致海马神经元损害保护作用的体外实验研究[D];广西医科大学;2012年

【二级参考文献】

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1 赵敬国;张巨;高凤彤;孙鸿斌;王为;;微囊化转NGF基因NIH3T3细胞填充静脉修复大鼠坐骨神经缺损的作用[J];吉林大学学报(医学版);2006年02期

2 张玉华,赵瑞波,李宗敏,赵纲;病变侧亚低温对大鼠局灶脑缺血MAP_2表达的影响[J];哈尔滨医科大学学报;2004年02期

3 曾可斌,胡长林,陈阳美;大鼠海马神经元培养与鉴定[J];基础医学与临床;2004年05期

4 赵秀鹤;迟兆富;尚伟;迟令懿;;新生大鼠海马神经元的体外原代培养[J];基础医学与临床;2007年03期

5 潘俊杰;施海明;罗心平;李剑;梁旺;张进;马端;;U937单核细胞几种不同转染方法的比较[J];复旦学报(医学版);2010年05期

6 ;Role of chloride channels in nitric oxide-induced rat hippocampal neuronal apoptosis in vitro[J];Neural Regeneration Research;2010年09期

7 李胜富,毛萌,周晖,李幼平,孙明菡;胚鼠大脑皮质神经元的最佳分离和培养方法的探讨[J];生物医学工程学杂志;2001年03期

8 潘永英;彭书;赵一凡;王寿平;;大鼠海马神经元的原代无血清培养及鉴定[J];实用医学杂志;2006年07期

9 叶双梅;阚淳一;杨丽兰;杨洁;马全富;吴明富;卢运萍;王世宣;;人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较[J];华中科技大学学报(医学版);2011年02期

10 侯澍;胡林森;常明;吴江;张磊;李红杰;;NGF诱导PC12细胞早期分化的DIGE分析[J];中风与神经疾病杂志;2006年01期

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1 卢习;范力;邵虹;段明慧;陈树林;赵善廷;;摇晃蛋白引起神经元分枝并促进树突发育[J];中国免疫学杂志;2014年02期

2 甘思德;神经元胞浆转运和分子信息递传(续)[J];生理科学;1982年06期

3 甘思德;神经元胞浆转运和分子信息传递[J];生理科学;1982年05期

4 王廷华,吴良芳,廖得阳;神经元生长发育的调控机制[J];昆明医学院学报;2002年01期

5 薄爱华;刘建国;周济远;韩淑琴;夏玲;王振忠;李英;;大鼠口鼻部眶下神经末梢类型及其相应神经元胞体在半月状神经节内的分布[J];解剖学杂志;1985年01期

6 冯林音，谷华运;鼠胚中脑多巴胺神经元的体外发育及靶细胞对其影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;1994年03期

7 邵金贵,忻国妹;人胎舌内氮能神经元发育的形态学研究[J];解剖学报;2001年03期

8 王廷华,吴良芳,廖德阳,周雪;成年猫L_6DRG神经元按大小分类的形态学证据[J];昆明医学院学报;2000年01期

9 王福庄，丁爱石，魏文，，张双喜;NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用[J];神经解剖学杂志;1994年04期

10 徐天乐;神经元钙信号的分子机制[J];神经解剖学杂志;1998年02期

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1 刘深泉;姚良瑾;覃秋菊;吕凡;杨志华;;神经元的形态识别和电位发放特性[A];第十二届全国非线性振动暨第九届全国非线性动力学和运动稳定性学术会议论文集[C];2009年

2 李娟;陈熔;刘晓燕;谢华富;何涛;;CCK_8与EGF在小鼠神经元中的协同作用研究[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年

3 邵金贵;忻国妹;;人胎消化系统氮能神经元发育的研究[A];2003’离子通道、受体与信号转导专题研讨会专辑[C];2003年

4 霍福权;汪静;李云庆;陈涛;韩峰;唐敬师;;腹外侧眶皮层GABA能神经元表达5-HT1A受体[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

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1 杨志军;大鼠脑内星形胶质细胞对渗透压改变的反应及其和神经元相互关系的形态学研究[D];第四军医大学;2002年

2 赵东芹;大鼠下丘脑前部—延髓内脏中枢参与束缚—浸水应激反应的神经元类型及突触可塑性[D];山东师范大学;2011年

3 张伟伟;神经营养因子和骨骼肌对DRG神经元生长的调节作用[D];山东大学;2013年

4 邢自力;NAD~+对神经元氧糖剥夺损伤的作用研究[D];复旦大学;2007年

5 熊巍;钙离子和蛋白激酶A对背根神经节神经元胞体囊泡转运过程的调控[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2006年

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9 万萍;神经元内Munc-18蛋白的漏出及其在神经元表面的分布[D];复旦大学;2008年

10 杨瑶斐;IL-6受体的存在方式对神经元IL-6信号转导的影响[D];浙江大学;2008年

本文编号：2555554