胰腺星状细胞的分离、培养、鉴定及其早期活化机制的实验研究

发布时间：2019-11-10 16:31

【摘要】： 目的:通过腹主动脉插管灌注胶原酶消化分离胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC),建立简单易行的PSC分离方法,并对PSC进行培养和鉴定;初步探讨PSC早期活化的机制。 方法:大鼠腹主动脉插管灌注后,经胶原酶消化、Nycodenz密度梯度离心,分离得到PSC;通过观察细胞形态、胞质内脂滴和免疫细胞化学方法检测结蛋白(desmin)、神经胶质酸纤维蛋白(glial fibrillaryacidic protein,GFAP)、α平滑肌肌动素(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达来鉴定PSC;RT-PCR方法及WestBlot方法测定PSC中Smad2/3表达。 结果:腹主动脉灌注法分离得到PSC,产率、活力和纯度分别为:15.3±4.6×10~3/g体重、95.0±3.5%、＞80%;培养24h后大多数细胞已贴壁,呈星状或多角形,48h后表达desmin、GFAP,并在96h后表达α-SMA;Smad2/3在PSC早期活化中显著高表达,48H后达其高峰。 结论:通过腹主动脉灌注法较容易分离得到PSC,其产率、活力和纯度较高,经鉴定后能够满足体外实验要求;Smad2/3的高表达是PSC早期活化过程中的中心环节。Smad2/3的高表达与Smad7无法抑制其活化从而造成两者失去平衡是引起PSC活化的主要原因。
【图文】：

后将I型受体磷酸化，磷酸化的I型受体诱导TGF一p传导通路上的SmadZ、Smad3磷酸化，Smad4与磷酸化的SmadZ或Smad3形成复合物，，该复合物将信号转导进细胞核内并发挥相应的功能(如图2)。Smad7由于缺乏C末段磷酸化位点不能被I型受体磷酸化，却通过干扰工型受体阻碍SmadZ和Smad3磷酸化来减弱TGF一p的生物学作用[‘3一”]。卫王~pandsxl份ds图2:TGF一p作用下，SmadZ的活化过程 Hirohideohnishi[‘6]研究了smadZ的的作用(smasZ介导了TGF一pl的信号通路，与PSCS活化呈正相关，促进PSCS产生EeM)，该研究与smadZ在即es中的相关研究[，7]有差异。smad7在PseS活化中的作的相关研究未见报道。2003年，Dooley等[’‘嘀腺病毒载体将Smad7一cDNA导入大鼠肝纤维化模型中

培养48h后PSC表达GEAP(x100)
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R657.5;R329

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 范萍,武正炎,王水,查小明,甄林林;人外周血中树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的初步研究[J];南京医科大学学报;2002年01期

2 陈启龙,李国威,陈晓,林仁勇,徐新建,温浩;转化生长因子β_1在胰腺组织中的表达:慢性胰腺炎发病机制探讨[J];中国普通外科杂志;2002年10期

本文编号：2558940