shh基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

发布时间：2019-11-17 00:40

【摘要】： 背景：Sonic Hedeghog (SHH)基因通过上调多种血管生长因子的表达来参与血管发生。内源性的SHH途径在发生心肌缺血后也会被激活,由于SHH基因有促进血管新生的作用,因此SHH基因可能作为潜在的治疗策略应用于心肌缺血。骨髓间充质干细胞(MSC)可向肌性细胞和内皮细胞分化,在心肌缺血损伤后促进新生血管形成和心肌重构,改善心功能。此外MSC还可接受多种载体的基因转染并在体内分化后仍可保持良好的遗传稳定性,故还可作为基因治疗的靶细胞。 目的：研究对大鼠MSC进行重组SHH基因修饰的可行性。为下一步基因与细胞联合干预心肌缺血大鼠模型做好准备。 方法：克隆Wistar大鼠SHH基因并测序鉴定。构建PCDNA3.1-SHH真核表达载体,采用密度梯度离心一贴壁培养法获取Wistar大鼠MSC,流式细胞术测定细胞表面标志CD34、CD44、CD45和SH3。采用Nucleofector电转染方法将PCDNA3.1-SHH真核表达载体转染至MSC,Western-Blot检测鉴定SHH在MSC中的表达情况。 结果：RT—PCR扩增的大鼠SHH基因编码序列(CDS)片段,经酶切和测序鉴定与Genebank一致。采用密度梯度离心一贴壁培养法可获取大鼠MSC,检测结果CD44、SH3阳性,CD45、CD34阴性,Western-Blot检测证实Nucleofector方法可将SHH基因转染进大鼠MSC,并获得有效表达,而转染空质粒的MSC未检测到表达。 结论：重组真核表达载体PCDNA3.1-SHH可成功在大鼠MSC中表达,为进一步研究移植SHH基因修饰的MSC对心肌缺血大鼠心功能的影响提供了实验依据。
【图文】：

500250图1一1大鼠RNA电泳图1一 2RT一PcR扩增SHH基因编码序列 M:DZ000MarkerM:D2000Marker100〔图1一 3pGEMT一SHH重组载体双酶切图1一 5PCDNA3.1一SHH重组 M:DZ000Marker真核表达载体双酶切 M:D2000PlusMarker

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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

【共引文献】

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本文编号：2562090