B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响分析

发布时间：2019-11-16 11:34

【摘要】：本研究利用基因工程技术探索B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响,并利用反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端缺失的B型流感病毒,评估去除NS1蛋白羧基端对B型流感病毒致病性的影响,探究B型流感病毒致病性变异的分子基础。通过全基因合成和反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端发生171个氨基酸缺失的B型流感病毒B/Yamagata/16/88株,命名为B-L5。将实验室之前拯救的母本株B/Yamagata/16/88(以下简称B-S9)和B-L5以3×105 EID5 0的攻毒剂量分别人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒滴度等方面进行致病性分析。成功构建了B型流感病毒B/Yamagata/16/88NS1蛋白羧基端缺失株反向遗传平台。母本株B-S9和NS1蛋白羧基端缺失株B-L5均能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠均呈现低致病性;B-S9感染小鼠后,从攻毒后第3d至第7d,体重持续下降,相反,B-L5感染小鼠后,只在攻毒后第2d出现体重下降,攻毒后第3d体重开始回升;B-S9和B-L5感染小鼠后均能在小鼠肺部进行复制,但攻毒后第3d,B-L5感染小鼠肺脏滴度要比B-S9低7 900倍,攻毒后第6d,B-L5感染小鼠肺脏已检测不到病毒复制。实验结果表明,NS1蛋白羧基端缺失可以明显降低B型流感病毒对小鼠的致病性。B型流感病毒致病性变异的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统的建立为B型流感病毒分子机制的研究奠定了基础,同时也为B型流感减毒活疫苗的研究开辟了新途径。
【图文】：

图３Ｂ－Ｌ５的电镜照片（×４００００）Ｆｉｇｕｒｅ３ＥｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｇｒａｐｈｏｆＢ－Ｌ５（×４００００）暂下降外，基本无变化（图５）。图４攻毒后小鼠生存率Ｆｉｇｕｒｅ４Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ图５攻毒后小鼠体重变化率Ｆｉｇｕｒｅ５Ｐｒｅｃｅｎｔｃｈａｎｇｅｉｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ６各组织病毒滴定结果在攻毒后第３ｄ和第６ｄ测定小鼠肺脏中的病毒滴度，以评价病毒的毒力。结果显示，虽然两种病毒均能在小鼠肺脏中复制，但攻毒后第３ｄ，Ｂ－Ｌ５在小鼠肺脏中的滴度要比Ｂ－Ｓ９低约７９００倍，而攻毒后第６ｄ小鼠肺脏内已检测不到Ｂ－Ｌ５的复制，说明ＮＳ１蛋白羧基端缺失的Ｂ－Ｌ５对小鼠的致病性要明显低于母本株Ｂ－Ｓ９（图６；虚线表示最低检测线）。图６攻毒后第３ｄ和第６ｄ小鼠肺脏中的病毒滴度Ｆｉｇｕｒｅ６Ｖｉｒａｌｔｉｔｅｒｓｉｎｌｕｎｇｓｏｆｍｉｃｅａｔ３ｄａｙｓａｎｄ６ｄａｙｓ讨论流感病毒致病性分子机制研究一直是流感病毒研究的一个热点，然而，目前的研究主要集中在Ａ型流感病毒上，对Ｂ型流感病毒致病性分子机制缺乏深入的研究。Ｂ型流感病毒与Ａ型流感病毒有相似性也有其独特的一面，包括编码ＮＢ蛋白、不编码ＰＢ１－Ｆ２蛋白以及病毒蛋白的长度和基因非编码区长度与Ａ型流感病毒不同等，这说明Ｂ型流感病毒的致病性分子机制可能与Ａ型流感病毒不完全相同。反向遗传学是当前研究流感病毒致病性机制及研发新型

图３Ｂ－Ｌ５的电镜照片（×４００００）Ｆｉｇｕｒｅ３ＥｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｇｒａｐｈｏｆＢ－Ｌ５（×４００００）暂下降外，基本无变化（图５）。图４攻毒后小鼠生存率Ｆｉｇｕｒｅ４Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ图５攻毒后小鼠体重变化率Ｆｉｇｕｒｅ５Ｐｒｅｃｅｎｔｃｈａｎｇｅｉｎｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔｏｆｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｖｉｒｕｓｅｓ６各组织病毒滴定结果在攻毒后第３ｄ和第６ｄ测定小鼠肺脏中的病毒滴度，以评价病毒的毒力。结果显示，虽然两种病毒均能在小鼠肺脏中复制，但攻毒后第３ｄ，Ｂ－Ｌ５在小鼠肺脏中的滴度要比Ｂ－Ｓ９低约７９００倍，而攻毒后第６ｄ小鼠肺脏内已检测不到Ｂ－Ｌ５的复制，说明ＮＳ１蛋白羧基端缺失的Ｂ－Ｌ５对小鼠的致病性要明显低于母本株Ｂ－Ｓ９（图６；虚线表示最低检测线）。图６攻毒后第３ｄ和第６ｄ小鼠肺脏中的病毒滴度Ｆｉｇｕｒｅ６Ｖｉｒａｌｔｉｔｅｒｓｉｎｌｕｎｇｓｏｆｍｉｃｅａｔ３ｄａｙｓａｎｄ６ｄａｙｓ讨论流感病毒致病性分子机制研究一直是流感病毒研究的一个热点，，然而，目前的研究主要集中在Ａ型流感病毒上，对Ｂ型流感病毒致病性分子机制缺乏深入的研究。Ｂ型流感病毒与Ａ型流感病毒有相似性也有其独特的一面，包括编码ＮＢ蛋白、不编码ＰＢ１－Ｆ２蛋白以及病毒蛋白的长度和基因非编码区长度与Ａ型流感病毒不同等，这说明Ｂ型流感病毒的致病性分子机制可能与Ａ型流感病毒不完全相同。反向遗传学是当前研究流感病毒致病性机制及研发新型

【共引文献】

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