丁酸对小鼠骨髓源树突状细胞的免疫调节作用

发布时间：2019-11-22 17:30

【摘要】：目的:观察肠道细菌代谢产物丁酸对体外培养小鼠骨髓源树突状细胞(Bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)表型及功能的影响,并探讨其可能的机制。方法:利用丁酸盐对GM-CSF和IL-4体外诱导的BMDCs细胞进行处理,采用流式细胞术检测BMDCs细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC的表达及其对T细胞增殖的影响;用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测其细胞因子IL-6、IL-12的表达;用格里斯反应(Griess reaction)和免疫印迹法(Western blot)分别检测DC细胞产生NO2-的生成和Toll样受体-4(TLR4)信号通路中ERK分子的磷酸化。结果:丁酸可下调LPS诱导的成熟BMDCs细胞CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC分子的表达。同时,丁酸也可抑制IL-6和IL-12的分泌,并抑制树突状细胞对OVA257-264抗原特异性T细胞的增殖。进一步的Western blot检测结果显示丁酸可抑制DC细胞TLR4信号通路中ERK分子的磷酸化。结论:丁酸可通过抑制DC细胞TLR4信号通路中ERK分子的磷酸化,下调DC细胞的免疫功能。
【图文】：

跋臁?2.2丁酸对BMDC细胞IL-6、IL-12和NO分泌的影响不成熟BMDCs组与LPS刺激成熟BMDCs组比较显示，成熟BMDCs分泌的细胞因子IL-6、IL-12(图2A)和NO(图2B)明显增加。但加入丁酸盐处理后，该BMDCs细胞对此类细胞因子和NO的分泌水平出现明显下降。此结果说明成熟BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO受到丁酸的抑制。但不成熟BM-DCs组与丁酸盐/不成熟BMDCs组间结果比较显示，BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO并未受到影响，以上结果说明丁酸的处理能够抑制成熟BMDCs细胞分泌细胞因子IL-6、IL-12、NO，而对不成熟BMDCs细胞并无影响。图1丁酸对BMDC细胞膜表面分子的影响Fig．1EffectsofbutyrateonphenotypeofBMDCs2.3丁酸对BMDCs激活抗原特异性CD8+T细胞增殖能力的影响BMDCs细胞主要的功能之一是激活抗原特异性T细胞的活化与增殖。为进一步研究丁酸对BMDCs细胞功能的影响，我们将OVA抗原特异性OT1CD8+T细胞进行CFSE标记后，与OVA荷载的BMDCs进行共培养，然后分析7-AAD-CD8+T细胞的CFSE荧光强度来反映CD8+T细胞增殖情况。图3和表3中的结果显示，体外培养的不成熟BMDCs细胞与LPS刺激成熟BMDCs细胞均可引起OVA抗原特异性CD8+T的增殖，但成熟BMDCs显示出较不成熟BMDCs细胞更强的激活CD8+T细胞增殖的能力，该组的CD8+T细胞增殖分裂甚至可达到第7代，，其第6代的CFSE荧光信号强度也强于不成熟BMDCs细胞组。但加入丁酸处理后，成熟BMDCs激活的CD8+T细胞增殖、分裂出现明显抑制。BMDC/LPS/BU组的CFSE荧光强度较BMDC/LPS组出现明显右移。此结果说明丁酸的加入使OVA抗原特异性CD8+T细胞的增殖受到明显抑制。而不成熟BMDCs细胞组与丁酸/不成熟BMDCs细胞组的结果显示，两组间T细胞的增殖的CFSE荧光信号强度最强的都在

-DC荧光信号强度出现右移，表达上调;但丁酸处理后可使这些膜表面分子的荧光信号强度又出现左移，表达下调。此结果说明丁酸能够抑制BMDCs细胞的成熟。但是，不成熟BMDCs组与丁酸盐/不成熟DC组间的结果显示，丁酸处理后不成熟BMDCs细胞表面的CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC表达没有明显改变。此结果提示丁酸对于成熟BMDCs细胞的表型有明显的抑制效应，而对于不成熟的BMDCs细胞并无明显影响。2.2丁酸对BMDC细胞IL-6、IL-12和NO分泌的影响不成熟BMDCs组与LPS刺激成熟BMDCs组比较显示，成熟BMDCs分泌的细胞因子IL-6、IL-12(图2A)和NO(图2B)明显增加。但加入丁酸盐处理后，该BMDCs细胞对此类细胞因子和NO的分泌水平出现明显下降。此结果说明成熟BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO受到丁酸的抑制。但不成熟BM-DCs组与丁酸盐/不成熟BMDCs组间结果比较显示，BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO并未受到影响，以上结果说明丁酸的处理能够抑制成熟BMDCs细胞分泌细胞因子IL-6、IL-12、NO，而对不成熟BMDCs细胞并无影响。图1丁酸对BMDC细胞膜表面分子的影响Fig．1EffectsofbutyrateonphenotypeofBMDCs2.3丁酸对BMDCs激活抗原特异性CD8+T细胞增殖能力的影响BMDCs细胞主要的功能之一是激活抗原特异性T细胞的活化与增殖。为进一步研究丁酸对BMDCs细胞功能的影响，我们将OVA抗原特异性OT1CD8+T细胞进行CFSE标记后，与OVA荷载的BMDCs进行共培养，然后分析7-AAD-CD8+T细胞的CFSE荧光强度来反映CD8+T细胞增殖情况。图3和表3中的结果显示，体外培养的不成熟BMDCs细胞与LPS刺激成熟BMDCs细胞均可引起OVA抗原特异性CD8+T的增殖，但成熟BMDCs显示出较不成熟BMDCs细胞更强的激活CD8+T细胞增殖的能力，该组的CD8+T细胞增殖分裂甚至可达?

【共引文献】

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3 李

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