广西巴马瑶族自治县人芽囊原虫感染情况调查与105个B.h分离株的RAPD分析

发布时间：2019-11-22 12:16

【摘要】：目的了解桂西北地区巴马瑶族自治县人芽囊原虫(Blastocystis hominis,B.h)的感染情况；对该地区105例B.h分离株的进行诊断性基因型分型及RAPD分析。方法随机抽取巴马瑶族自治县的5个行政村,收集当地居民的新鲜粪便,采有改良酸醚离心沉淀法,镜检定性诊断,用SPSS13.0统计分析不同调查点、性别、职业、年龄和民族人群芽囊原虫感染情况。从B.h阳性粪便中分离出虫体,体外培养后提取基因组DNA。先采用已知的7对STS引物对基因组DNA进行PCR扩增进行诊断性基因分型；再应用RAPD标记技术对分离株构建DNA图谱,然后分别用NTSYSpc和Popgene两种软件对分离株的遗传多样性进行聚类分析,并分别构建聚类分析图；最后将STS诊断性基因分型与RAPD的结果进行比较分析。结果共检查497例,人芽囊原虫感染者215例,平均感染率43.26%。各行政村的感染率中,最高达55.74%,最低为32.14%。各性别、职业、年龄和民族间感染率差别均无统计学意义。以已知的7对STS引物作基因型鉴定,发现单纯1型25株,占23.81%(25/105);单纯6型1株,占0.95%(1/105)；混合型1株,为1型与6型的混合基因型,占0.95%(1/105)。未检出其余基因型,其余为未知基因型,占75.24%(79/105)。对所有B.h分离株构建RAPD图谱,共检测到112个多态性位点,片段大小在300-3400bp之间。聚类分析结果显示了105个分离株的遗传分化关系,地理分布相同的分离株遗传距离小。按地理分布将分离株划分为五个群体,其多态性位点所占比例分别为：91.07%、23.21%、83、04%、84.82%和81.25%；五个行政村群体中,Nei’s多样性指数为0.1161±0.2120-0.2923±0.1739,shannon's多样性指数为0.1609±0.2940-0.4417±0.2297。群体间遗传多态性指数Ht为0.3287±0.0197,群体内遗传多态性指数Hs为0.2461±0.0146。五个行政村群体遗传分化指数(Gst)为0.0573-0.2573,其中巴马镇盘当村与凤凰乡德纳村的遗传分化指数最大为0.2573,说明两者之间的发生了较大的遗传变异,而燕洞乡龙威村与甲篆乡兴仁村的分化指数最小,为0.0529；由五个行政村的聚类分析图可以看出：五个行政村的系统树只有一个分支,亲缘关系很近。燕洞乡龙威村与甲篆乡兴仁村先聚在一起,再与西山乡福厚村聚类,然后再一起与巴马镇盘当村聚类,最后与凤凰乡德纳村聚类。结论(1)广西巴马瑶族自治县不同人群人芽囊原虫感染率高达43.26%,属于高度流行区之一。(2)巴马瑶族自治县存在1和6两种已知基因型B.h,并存在混合感染情况。(3)在已知基因型中也存在不同虫株间的差异,提示可能存在亚基因型。(4)发现数量众多的未知基因型虫株,它们之间遗传差异明显,基因结构复杂,至少存在11个以上的类群。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R382

【参考文献】