人外周血平滑肌祖细胞与成熟血管平滑肌细胞生物学特性比较

发布时间：2019-11-24 09:19

【摘要】： 目的：探讨成人外周血来源的平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cells,SPCs)与成熟血管平滑肌细胞(smooth muscle cells, SMCs)细胞形态、增殖潜能等方面的异同点,为血管组织工程提供可靠的种子细胞来源。 方法：1、密度梯度离心法分离成人外周血中单个核细胞,于用纤粘连蛋白包被的含血小板衍生生长因子BB (Platelet derived growth factor BB, PDGF-BB)和EGM-2培养基的培养瓶中诱导培养,观察细胞形态变化,常规换液、传代、冻存及复苏。 2、通过手术取得实验用大隐静脉3cm,采用胶原蛋白酶消化、差异贴壁法原代培养,含PDGF-BB的EGM-2培养基培养,观察细胞形态,获得平滑肌细胞。 3、平滑肌祖细胞及平滑肌细胞分别进行细胞爬片,应用细胞免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白(a-SMA)和调宁蛋白(calponinl)的表达。 4、用RT-PCR检测平滑肌肌动蛋白.(alpha-smooth muscle actin, a-sma)和调宁蛋白(calponin 1, cap)的mRNA表达。 5、MTT(四唑盐比色实验)分别检测第6代平滑肌祖细胞与平滑肌细胞的增殖能力。 结果：1、SPCs传代细胞培养达80-90%融合时,呈螺旋状排列,并可呈典型“峰、谷”样形态,符合平滑肌细胞形态学特征。 2、平滑肌祖细胞可表达平滑肌细胞特异性标记α-SMA和calponinl。 3、第6代的SPCs(n=10, A=0.43±0.02)增殖能力明显强于第6代的SMCs(n=10, A=0.21±0.02, P0.01)。 结论：1、外周血中单个核细胞在PDGF-BB的刺激下可以分化为具有平滑肌细胞特性的平滑肌祖细胞。 2、平滑肌祖细胞较平滑肌细胞增殖旺盛,培养3个月未见老化,具有发展为-种理想的血管组织工程种子细胞来源的可能性。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2565364