LPA对肺成纤维细胞胶原合成的影响

发布时间：2019-12-03 01:15

【摘要】： 目的: 白细胞介素-13(Interleukine-13,IL-13)是一个主要由Th2细胞分泌的多效能细胞因子。已证实IL-13是调控肺纤维化的主要Th2细胞因子,IL-13通过与IL-13受体α1(IL-13Rα1)相结合可以产生促纤维化作用。而最近研究发现IL-13受体α2(IL-13Rα2),可以抑制IL-13信号转导的功能,上调IL-13Rα2的表达,可以抑制胶原的产生。本实验检测肺成纤维细胞(HFL-1)是否表达IL-13Rα2,研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)是否能上调IL-13Rα2的表达,进而是否能抑制肺成纤维细胞胶原的合成。方法: 1.台盼蓝染色检测HFL-1细胞的活性。2.HE染色观察HFL-1细胞形态。3.检测LPA刺激HFL-1细胞对IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA表达的影响:分别以LPA不同浓度、不同时间刺激HFL-1,RT-PCR检测IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA的表达。4.检测LPA刺激HFL-1细胞对Ⅰ型胶原(procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)mRNA表达的影响:首先LPA以不同时间刺激HFL-1细胞,用RT-PCR检测PCOLⅠmRNA的表达,再分四组:空白组、LPA组、IL-13组及LPA和IL-13混合组,RT-PCR检测PCOLImRNA的表达。5.免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果: 1. HFL-1细胞活性良好,且LPA对细胞无毒性作用。2. HE染色观察细胞为长梭形,核为椭圆形。3.RT-PCR检测结果显示,LPA刺激HFL-1细胞对IL-13Rα1mRNA的表达没有影响,但对IL-13Rα2mRNA有影响,随着LPA刺激时间的延长,IL-13Rα2mRNA的表达逐渐增高,随着LPA刺激浓度的增高,IL-13Rα2mRNA的表达也逐渐增高,但10μM组与1μM组比较有所降低,但没有统计学意义。4. RT-PCR检测结果显示,LPA刺激HFL-1细胞可以降低PCOLImRNA的表达,并且随着刺激时间的延长,PCOLImRNA的表达逐渐减低。另外,结果显示IL-13组与对照组相比,IL-13组PCOLImRNA的表达增高,而LPA和IL-13混合组,PCOLImRNA的表达比LPA组较高,但比IL-13组较低。5.免疫组化结果显示:与对照组相比,IL-13组Ⅰ型胶原蛋白表达较高,LPA组Ⅰ型胶原蛋白表达较底,而LPA和IL-13混合组,PCOLI蛋白的表达比LPA组较高,但比IL-13组较低。结论: 1. LPA刺激HFL-1对IL-13Rα1的表达没有影响,但可以上调IL-13Rα2的表达,并且成时间浓度依赖性。2. LPA刺激HFL-1可以降低PCOLI的表达,并且呈时间依赖性。3. IL-13刺激HFL-1可以上调PCOLI的表达。
【图文】：

细胞,纯度,图片,琼脂糖凝胶电泳

图 2.HFL-1 细胞 HE 染色图片(×400)Figure2. Diagram of HFL-1s by HE staining样品的纯度与质量D260nm/OD280nm 值均在 1.8～2.0 之间，表明总 R琼脂糖凝胶电泳结果：显示 18S（相当于 1.9kb（mRNA）清晰，且 28：18 为 2：1，，提示 RN28S18S

细胞,琼脂糖电泳,凝胶电泳,纯度

图 2.HFL-1 细胞 HE 染色igure2. Diagram of HFL-1s纯度与质量/OD280nm 值均在 1.8～2凝胶电泳结果：显示 18A）清晰，且 28：18 为
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R329

【参考文献】