实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠视觉功能损伤的机制研究

发布时间：2020-01-22 15:52

【摘要】：目的：动态观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis, EAE)小鼠视网膜多巴胺能无长突细胞(dopaminergic amacrine cell,DAC)、眼特化区域分离(eye-specific segregation)和离视网膜投射的变化结合病理学、分子生物学等方法，研究EAE小鼠发病期视觉功能障碍的可能机制。 方法： C57BL/6雌性小鼠随机分为对照组（20只）和EAE组(50只)。首先参照Mendel I造模方法并加以改进，采用短肽链的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）作为抗原诱导C57BL/6小鼠EAE模型。自免疫当天开始观察记录小鼠基本情况，根据Webster等[15]分级标准对小鼠进行神经功能评分。其次EAE组再随机分为5个亚组，每个亚组10只，各个亚组小鼠在抗原免疫后13d、18d、23d、28d、38d进行双眼玻璃体内荧光染料注射，左眼注射Alexa-488（绿），右眼注射Alexa-555（红），注射量均为1.5ul。各组小鼠染料注射完成48h后，即抗原免疫后l5d、20d、25d、30d、40d处死，取小鼠视神经切片进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色和Luxol FastBule髓鞘染色后光镜下观察组织形态学变化，统计视神经炎发病率；取脑组织固定后置于荧光显微镜下观察球后视通路、LGN和SC的变化情况；观察并记录整体观情况后，琼脂包埋脑组织振动切片机切片，收集LGN部分异侧投射面积最大的3片和SC部分最靠近中线的4片，在荧光显微镜下观察眼特化区域分离情况并摄片，利用Matlab图象分析软件进行图像处理并计算切片的同侧(ipsilateral)眼睛轴突投射面积、同侧(ipsilateral)和异侧(contralateral)投射区域重叠的面积。用免疫荧光染色检测视网膜各时间点酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)表达，计数多巴胺能无长突细胞(dopaminergic amacrine cell, DAC)数目。 结果： 1、EAE组小鼠临床发病率96%，高峰症状评分（3.53±0.75）分，视神经炎发病率77.1%（病理诊断）。 2、 EAE小鼠双眼特化区域分离障碍。LGN双眼特化区域分离结果：免疫后15d，EAE组双侧投射重叠面积与Saline组均无明显差异；免疫后20、25、30d EAE组双侧投射重叠面积与Saline相比均显著增加；SC双眼特化区域分离结果：免疫后20d开始EAE组双侧投射重叠面积较Saline组显著增加，25d达最高值（P=0.0012）。 3、EAE小鼠视网膜DACs减少：同Saline组相比，免疫后20d, EAE小鼠DACs数目开始减少；25d时与Saline组有显著性差异。 4、EAE小鼠球后视通路损伤：EAE组免疫后15、20、25、30d，脑组织整体观视通路显示正常，SC、LGN均清楚可见。免疫后40d，SC可见，4只小鼠LGN仅残留部分可见，1只LGN完全缺失，1只显示正常。发生ON的EAE小鼠中，免疫40d时，第一视通路损伤发生率83.33%。 结论： 1、MOG35-55诱导C57BL/6小鼠EAE模型，发病率高，重复性好，视神经病理损伤明显，是研究ON和MS的理想模型。 2、EAE小鼠视觉功能损伤主要由两方面所致： ①发病早期视觉信息处理障碍；②中后期视觉信号传递受阻。 3、EAE小鼠视网膜内多巴胺能无长突细胞减少进而导致各类细胞耦合发生异常，，可能是视觉信息处理障碍的原因之一。 4、EAE小鼠球后通路以第一视通路破坏为主，由近中枢端向视网膜侧发展，导致视觉信号传递受阻，同时为神经再生研究提供了理论依据和证据支持。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R744.51

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本文编号：2571993