人树突状细胞中WNT蛋白分泌机制的初步研究

发布时间：2020-01-27 17:53

【摘要】： 树突状细胞(dendritic cells, DC)是体内最重要的抗原提呈细胞,而Wnt信号通路最近被证实在免疫系统中发挥多种调控作用,本论文是关于DC中Wnt信号通路的一些研究。本实验从外周血中分离获得单核细胞,体外加入细胞因子GM-CSF和IL-4诱导培养5天后获得DC,然后以这种单核细胞来源的DC为研究对象,探讨DC中Wnt通路成员表达分泌及其对DC功能的影响。 本实验首先通过RT-PCR的方法检测DC中Wnt通路成员的表达情况,结果显示,在单核细胞向DC的分化过程中始终表达WNT5A配体及Wnt通路多种受体Frz1、Frz2、Frz3、Frz4、LRP6以及ROR2的mRNA,免疫荧光的结果也证实WNT5A分布在DC的整个胞浆。DC中多种Wnt通路成员的表达提示我们Wnt信号通路可能对DC的分化或功能起重要的调控作用。 SB216763可以作为经典Wnt通路(Wnt/β-catenin信号通路)的活化剂。本实验结果显示,体外加入10μM的SB216763处理2-3 h后,能引起DC中β-catenin的积累活化,而β-catenin信号活化后能引起DC表型的成熟,DC的共刺激分子CD80、CD86及与T细胞作用的功能分子CD40表达的平均荧光强度均明显增加,几乎达到成熟DC的水平。但是这种DC在功能上并未成熟,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12 p40、TNF-a及趋化因子受体CCR7的表达远低于LPS促成熟的DC,甚至低于对照组未成熟DC,因此属于一种耐受型的DC。 另外,由于DC能分泌WNT蛋白,DC中WNT蛋白的分泌机制以及可溶性差的WNT蛋白在细胞间如何运输,这些都没有明确的结论。最近有研究证明,果蝇等模式生物发育过程中WNT蛋白的分泌需要Wntless和Retromer Complex的协助。为证明DC中WNT5A的分泌是否也有Wntless和Retromer Complex的参与,本实验利用RNAi的方法干扰Wntless分子以及Retromer Complex的关键亚基Vps35的表达,免疫荧光结果显示,Wntless和Vps35被干扰后DC细胞膜上WNT5A的分布明显减少。因此本实验证明,Wntless和Retromer Complex参与DC中WNT蛋白的分泌过程。
【图文】：

大部分细胞半悬浮生长(图IB)。加入LPS促成熟的DC(matureDC，mDC)形态稍微变圆，突起变少但出现大量毛刺，尖锐的突触非常明显，出现一些大的集落(图IC)。图中一些非常小而圆的颗粒为混杂的淋巴细胞，其直径远小于10一20拜m的DC。

未加一抗;B实验组，，加WNTSA一抗)图4免疫荧光检测DC内WNTSA的分布(x400倍)C通路中表达多种Wnt受体Frz蛋白是Wni通路的主要受体，目前哺乳动物中己鉴定10种Frz受体S/6作为Frz受体的共受体，在经典Wni通路中是必不可少的。最近发酸激酶受体RORZ也可以作为WNT蛋白的受体。利用Rl’-PCR的方法内Wnt通路各种受体的表达情况，结果显示DC表达有Frzl、FrzZ、、LRP6以及RORZ等多种Wnt受体(图3)。RORZLRP6F『24
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392

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本文编号：2573702