一维凝胶电泳技术在血清差异蛋白质组学中的应用研究

发布时间：2020-03-03 13:28

【摘要】： 目的: 1、通过比较和优化用于SDS-PAGE电泳分析的血清样品制备方法,建立简便、灵敏的适合血清的小分子蛋白差异比较的技术。 2、运用生物学定量软件对SDS-PAGE胶图进行分析,将电泳条带的分子量和灰度进行量化处理,转换为可用于统计分析的数字形数据。 3、用生物信息学分析方法对所建立的用串联数据转换方法将一维凝胶电泳技术用于血清差异蛋白组学研究的可行性进行验证。方法: 1、运用盐析法、有机溶剂法和亲和层析柱法去除血清中高丰度蛋白,经蛋白浓度测定和SDS-PAGE电泳分析,比较各方法对高丰度蛋白去除效果及小分子蛋白保留和分布情况。 2、分别使用二层Tris-SDS-PAGE法、三层Tris-SDS-PAGE法、Tricine-SDS-PAGE法、尿素-Tricine-SDS-PAGE法对样品进行分离,比较各方法对小分子蛋白分离的效果。 3、运用凝胶成像系统中的定量软件Quantity One对各电泳图上的各条带进行定量分析,将图形结果转换为数据结果。 4、将上述技术用于正常人和肝癌病人的血清的小分子蛋白差异分析,验证该研究方法的可行性。结果: 1、乙腈沉淀法能去除血清样品中90%左右的高、中丰度蛋白,同时可残留更多15kDa以下的小分子蛋白;盐析沉淀法和亲和层析柱法均能去除血清样品中大部分高丰度蛋白,但这两种方法去除高丰度蛋白后所得的15kDa以下的小分子蛋白较乙腈沉淀法所得到的相应蛋白少,且亲和层析柱法更能特异地只去除血清中的白蛋白和免疫球蛋白。 2、尿素-Tricine-SDS-PAGE能很好地分离血清中的小分子蛋白,比15%的二层Tris-SDS-PAGE、15%的三层Tris-SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE分离效果更好,15kD以下的蛋白条带清晰可见,更适合用软件对各小分子量条带进行Quantity One软件定量分析。 3、运用同前所述凝胶定量软件Quantity One对胶图中的泳道/条带进行定量法、等高线定量法分析并将结果转换为数据后用SPSS13.0生物统计学方法对所得数据进行t检验统计分析,结果表明,在ρ0.05,有10个条带具有显著差异。结论: 1、用1.2倍体积乙腈沉淀法处理血清样品可在去除绝大部分高、中丰度蛋白的同时收获更多的15kDa以下的小分子量蛋白,适合用SDS-PAGE法对血清中15kDa以下的蛋白进行差异研究。 2、尿素-Tricine-SDS-PAGE电泳在分离用乙腈沉淀法去除高丰度蛋白的血清样品中具有明显优势,15kDa以下的小分子条带清晰。 3、使用凝胶定量软件Quantity One对经尿素-Tricine-SDS-PAGE分离的乙腈法去除高丰度蛋白的血清样品进行分析,具有可行性。 4、用以上所确定的最适方法对正常人和肝癌患者血清进行验证分析,表明一维凝胶电泳技术在血清差异蛋白初期比较研究中具有一定的可行性。
【图文】：

样品池,丰度,蛋白,电泳

度5%）；电泳上样量为18μl，恒压80V电泳至溴酚蓝进入分离胶后将电压升至120V，恒压电泳至溴酚蓝到达凝胶底部，该实验重复3次，结果一致，仅出示一次电泳结果，电泳结果如图1-1所示，在200kDa至25kDa之间存在大量高丰度蛋白，在15kDa至10kDa之间的小分子蛋白无法清晰显示。图1-1 未除高丰度蛋白前三个标准样品池SDS-PAGE图。1为Fermentas Page Ruler蛋白标准品（分子量200，150，120，100，85，70

硫酸铵沉淀,标准样品,分子量

图1-2 不同浓度硫酸铵沉淀标准样品池SDS-PAGE图。1为Fermentas Page Ruler蛋白标准品（分子量200，150，，120，100，85，70，60，50
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R341

【参考文献】