胃肠多肽调节多器官功能障碍综合征时肠淋巴细胞归巢

发布时间：2020-03-25 06:54

【摘要】： 多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)是创伤及感染后最严重的并发症，发病率高，往往由于来势凶猛，病情发展急剧，难以被迄今的器官支持治疗所遏制，，死亡率很高。肠道被认为是MODS的启动器官，许多研究证实，严重创伤和感染早期，肠黏膜屏障功能减退、肠道微生态失衡以及肠黏膜免疫功能失调，大量炎症介质如TNF-α、IL-1等产生，引起全身炎症反应综合征(system inflammatory reaction syndrome，SIRS)，导致器官功能障碍，最终发展为MODS。肠黏膜免疫系统是一个完整的组织网络，由Peyer淋巴结、肠黏膜固有层淋巴细胞、上皮间淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes，IELs)组成。其主要的效应细胞有CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、B细胞、分化的浆细胞、巨噬细胞和抗原呈递细胞等；主要的效应分子是SIgA。黏膜免疫活动包括肠淋巴细胞活化、归巢和SIgA分泌等。它的主要功能是参与机体的免疫防御，如参与机体的过敏反应、超敏反应和炎症。近年来，越来越多的研究表明，肠黏膜损伤在MODS发生发展中起着重要作用，但构成肠黏膜屏障的重要组成部分——肠黏膜免疫系统在MODS中的作用却不清楚。肠淋巴细胞归巢作为肠黏膜免疫系统重要免疫活动之一，它参与了肠黏膜急、慢性炎症的发生；使肠黏膜有效地行使免疫监视和免疫清除功能；是肠黏膜免疫系统与系统免疫系统沟通的重要桥梁。胃肠多肽、细胞黏附分子及一些细胞因子可能对淋巴细胞的迁移产生重要影响。然而MODS时肠黏膜淋巴细胞迁移的规律及其调控机制却并不清楚。此外，肠黏膜的神经细胞与神经介质、内分泌细胞与多肽分子、免疫细胞与细胞因子都是机体中数量最集中的部位。胃肠多肽是神经-内分泌-免疫网络中的重要调节因子。研究表明，肠黏膜固有层和Peyer淋巴结密集分布着肠血管活性多肽(vasoactive intestinal polypeptide，VIP)和生长抑素(somatostatin，SST)等肽能神经纤维，这些肽能神经纤维和上皮层及固有层的淋巴细胞，巨噬细胞等免疫细胞毗邻，直接调节着肠黏膜免疫系统的功能。此外，特异性VIP受体广泛存在于Peyer淋巴重庆医科大学博士学位论文结高内皮小静脉(high endothelial venule，HEV)及淋巴管内部和周围，以及滤泡边缘的T细胞中，SST受体也在小鼠Peyer淋巴结和人肠豁膜固有层淋巴细胞中被发现，这些受体可能对于淋巴细胞通过Peyer淋巴结或肠豁膜固有层的迁移具有重要的调节作用。但VIP或SST对肠淋巴细胞迁移调节的研究不多，至于它们对MODS时肠淋巴细胞调节的研究尚未见报道。研究目的 l、探讨生理情况下: 1) VIP或SST对大鼠肠淋巴细胞向系统免疫系统迁移的影响; 2) vIP或ssT对大鼠肠淋巴细胞归巢至肠相关淋巴组织(gut一associated lymphoid tissue，GA叮)的调节; 2、MODS时肠淋巴细胞再循环的改变，从豁膜免疫的角度探讨MODS的病理生理机制: 3、VIP或SST对MODS转归的影响; 4、MODS时VIP或SST对肠淋巴细胞归巢的调节，从豁膜免疫的角度理解MODS 的病理生理机制; 5、viP或SST是否通过肠淋巴细胞上的相应受体调节肠淋巴细胞的归巢? 6、viP或SST对存在于小肠内皮细胞上决定肠淋巴细胞归巢到GALT的关键豁附分子一豁膜地址素细胞豁附分子一1(mucosal“枷ssin eella曲esion moleeule一l， MAdCAM一l)的影响，以确定这两种胃肠多肤调节肠淋巴细胞归巢的分子机制。研究方法 1、从大鼠肠系膜淋巴管插管引流淋巴液，收集肠淋巴细胞; 2、E花结分离法测定T细胞比例; 3、流式细胞仪检测肠淋巴CD4+、CDS+淋巴细胞; 4、slCr标记肠淋巴细胞示踪其在GALT的分布; 5、采用微型无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉造成肠缺血再灌注损伤，诱导大鼠 MODS模型; 6、尸F冈F一a ELISA试剂盒测定肠淋巴液和外周血TNF一a水平; 重庆医科大学博士学位论文 7、酶学分光光度法测定外周血D一乳酸水平; 8、赏试剂盒测定肠淋巴液和外周血内毒素水平; 9、免疫组织化学法检测肠淋巴细胞T、B细胞比例; 10、苏木素一伊红染色法观察大鼠小肠、肝脏、肾脏和肺脏的组织学改变; 11、采用Rl斗PCR方法检测肠淋巴细胞上SST和VIP受体的mRNA表达; 12、采用W七stem blot方法检测小肠组织MAdCAM一1表达。研究结果 1、生理情况下，由肠勃膜进入血循环的肠淋巴量、单位体积淋巴细胞数及单位时间淋巴细胞数保持稳定;由血循环迁移至GALT的肠淋巴细胞比例:Peyer 淋巴结为3.83%士1.87%，小肠弥散淋巴组织为1.07%士0.61%。 2、viP(o.2Pmol.g一’·h一‘、7 hour)显著降低肠淋巴细胞由肠勃膜向血循环的迁移: 持续从静脉输入vIP后，5小时肠淋巴液中淋巴细胞总数为6.92士0.63、107个，显著低于对照组( 9.43士1.38/107个)，P0.05，降低26石%，而肠淋巴液量无显著改变，尸0.05，其中，T细胞降低20.6%，CDS+细胞降低1 1 .91%，CD4+细胞无显著改变;同时，vIP还抑制肠淋巴细胞由血循环进入GALT:Peyer淋巴结’‘cr-肠淋巴细胞量系体内总”c卜肠淋巴细胞量的1.83%士0.90%，显著低于对照组3.85%
【图文】：

肠缺血再灌注,大鼠,动脉夹,实验动物中心

材料和方法一、大鼠MODS模型的建立采用肠缺血再灌注方法制作大鼠MODs模型14一，](图4一1一l)。雄性wistar大鼠，重250一300克，重庆医科大学实验动物中心提供。实验前12小时禁食，自由喂水。术前从股静脉输入生理盐水(0.3ml爪)，剖开大鼠腹腔，用微型无创动脉夹夹住大鼠肠系膜动脉根部45分钟，松夹后再灌注6小时。

组织病理学改变,小肠绒毛,肝小叶,空泡化

与对照1组比较，MODS大鼠小肠绒毛部分脱落，水肿明显，大量炎症细胞浸润;肝实质细胞空泡化，肝小叶结构不清，汇管区大量炎症细胞浸润;肾小球结构不清;肺泡间隔增厚，大量炎症细胞浸润(图4一1一2)。45
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363

【参考文献】