【摘要】：目的通过观察清肠化湿方对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎模型大鼠的治疗效果,以NF-κB为中心分别探讨其抑制NF-κB过度活化,减少肠黏膜促炎细胞因子分泌,保护肠上皮紧密连接(tight junction, TJ)蛋白,减少树状突细胞(dendritic cells, DCs)数目并抑制其活化程度,以及抑制细胞间黏附分子ICAM-1表达的疗效机制,为临床用药提供客观依据,为开发治疗UC的中药新药打下科学基础。 方法将40只雄性清洁型Wistar大鼠,体重(200±20)g,6-7w鼠龄,随机分为四组,每组10只；空白对照组,常规饲养,自由饮水进食。采用TNBS造模后分为模型对照组：造模后每日给予等体积生理盐水灌胃。清肠化湿方组：按成人10倍剂量(12.8g生药.kg-1.d)一次性灌胃给药。美沙拉嗪组,按按成人10倍剂量(0.67g.kg-1.d)一次性灌胃给药；于造模后第2天给药,连续10d。最后1次给药后,禁食24h处死大鼠,留取新鲜结肠标本和肠系膜淋巴结组织,观察各组大鼠一般情况和结肠组织病理形态：ELISA法检测肠黏膜组织促炎细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平；免疫组化法检测结肠黏膜组织和MLN DCs数目,流式细胞仪检测肠系膜淋巴结大鼠DC特异标志分子OX-62百分比和DCs表面分子MHC-Ⅱ和CD86的表达；免疫组化法检测大鼠结肠粘膜ICAM-1的表达情况,ELISA法检测sICAM-1水平；免疫组化SP法检测大鼠结肠粘膜上皮occludin、 claudin-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR (real-time PCR)方法检测结肠黏膜组织(?) occludin mRNA、claudin-1mRNA表达情况；(?)eal-time PCR法检测NF-κBp65mRNA的表达水平,免疫组化SP法和蛋白免疫印迹法检测大鼠结肠粘膜NF-κB p65的表达水平；采用相关分析探讨NF-κB p65与炎性积分、IL-1β, TNF-α, IL-6, Claudin-1、occludin, DCs, ICAM-1等指标的相关性。 结果造模后,模型组大鼠比空白组大鼠结肠黏膜的病理炎性积分明显升高(P0.01)；促炎细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平明显升高(P0.01)；结肠粘膜DCs和MLNDCs计数明显增多(P0.01),MLN DCs表面分子MHC-Ⅱ表达水平明显增高(P0.01)；ICAM-1和sIC AM-1水平明显增高(P0.01)；occludin mRNA、claudin-1mRNA, occludin、 claudin-1蛋白表达水平下降(P0.05)；NF-κB p65mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平增高(P0.05)。经清肠化湿方和美沙拉嗪治疗后,病理炎性积分明显降低(P0.01)；IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平明显降低(P0.01)；结肠粘膜DCs和MLN DCs计数明显减少(P0.01),MLN DCs表面分子MHC-Ⅱ表达水平明显降低(P0.01)；ICAM-1和sICAM-1水平明显降低(P0.01);occludin mRNA、claudin-1mRNA, occludin、claudin-1蛋白表达水平下降(P0.05);NF-κB p65mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平降低(P0.05)。NF-κB p65与炎性积分、IL-1β, TNF-α, IL-6, Claudin-1、occludin, DCs, ICAM-1等指标呈高度相关(P0.01)。治疗前后各组大鼠MLN DCs的比例和其表面分子CD86表达水平无统计学差异(P0.05)；清肠化湿方和美沙拉嗪对大鼠各观察指标的影响无统计学差异(P0.05)。 结论清肠化湿方可以改善TNBS模型大鼠结肠的一般情况和炎症病变,其机制与其可以抑制结肠黏膜NF-κB的表达,从而降低促炎细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌水平,减少结肠黏膜及MLN DCs的数目,抑制DCs的活化,降低结肠黏膜黏附分子ICAM-1的表达水平,增加UC结肠黏膜紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin的表达,恢复肠粘膜屏障功能等有关。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R259
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 张声生;;溃疡性结肠炎中医诊疗共识意见[J];中华中医药杂志;2010年06期
2 张炜;四君子汤合四逆散加味治疗溃疡性结肠炎 附:63例病例报告[J];成都中医药大学学报;2002年02期
3 李桂贤;黄勇华;林才智;陈国忠;李保良;梁雪;何慧;彭卓嵛;;加味柴芍六君颗粒对实验性溃疡性结肠炎大鼠T淋巴细胞亚群的影响[J];广西医科大学学报;2008年01期
4 杨辉;王翼洲;;热瘀散对溃疡性结肠炎胃肠湿热型大鼠模型MDA、SOD、IL-6的影响[J];广西中医药;2007年04期
5 施斌;谢建群;张涛;徐海珍;袁建业;郑昱;马贵同;陆雄;;清肠栓对大鼠溃疡性结肠炎淋巴细胞凋亡调控蛋白Bcl-2及Bax表达的影响[J];河南中医;2008年12期
6 沈洪;;溃疡性结肠炎治疗用药的几个特点[J];江苏中医药;2006年01期
7 顾立刚,郭学志,王庆国,柳翼,洪燕珠;疏肝健脾方对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡的影响[J];北京中医药大学学报;2000年04期
8 贾新明,刘学进,孙嘉璐,张钰,梁祖兰;丹参联合柳氮磺胺吡啶治疗溃疡性结肠炎的疗效观察[J];临床荟萃;2003年24期
9 李桂芝,温方红,李廷军,赵宪利;T淋巴细胞亚群检测与溃疡性结肠炎[J];临床荟萃;2004年12期
10 赵海梅;刘端勇;汤菲;左志琴;;活血理肠丸治疗溃疡性结肠炎的药效学机制研究[J];辽宁中医杂志;2010年01期
相关博士学位论文 前1条
1 周红光;溃克灵治疗溃疡性结肠炎药效及免疫机理研究[D];南京中医药大学;2009年
，
本文编号：
2631780
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/2631780.html
