1. HERG通道孔区外口的错义突变对其功能的影响 2. hKCNE4新基因的克

发布时间：2020-04-22 22:59

【摘要】：心律失常是常见的死亡和致残原因。据统计，美国每年有三十多万人发生猝死，而猝死的主要原因是原发性或继发性心律失常。长QT综合征(LQTS)被认为是非结构性心脏病患者猝死的主要原因，到目前为止，至少有六种基因的突变可引起LQT8，包括两个钾离子通道基因(KCNQ1，HERG)，两个β调节亚基基因(KCNE1，KCNE2)，一个钠离子通道基因(SCN5A)和一个钙离子通道释放基因(RYR2)。最新研究表明，大多数离子通道均参与心律失常的发生和维持，这些基因功能的变化不仅能引起离子通道病(Channelpathy)，而且还可能加剧一些离子通道相关性疾病(如心衰，心肌病和冠心病)的心电生理紊乱，甚至猝死。 1．HERG通道孔区外口的错义突变对其功能的影响 在心肌细胞复极化过程中，许多离子通道参与其动作电位的形成，其中HERG基因编码的钾离子通道在这一过程中发挥重要的作用。大部分心肌细胞均可检测到快速激活的延迟整流性电流(Ikr)，而形成该电流的主要亚基被认为是HERG通道。HERG基因的突变可引起遗传性LQTS，抑制Ikr的药物可引起获得性LQTS。HERG通道最重要的功能是其内向整流特性，通道的内向整流功能主要取决于其快速失活过程，C-型失活模式是HERG通道快速失活的重要机制。由于通道孔区的构象改变是C-型失活的结构基础，因此研究HERG通道孔区外口的功能对认识HERG通道的功能具有极为重要的意义，可以了解该区域变异导致LQTs及其它心律失常的分子机制，为临床干预和治疗提供必要的依据。 本研究采用Megaprimer方法制备HERG V630A、P632S、N633S突变体，并亚克隆到pSP64和pcDNA3.1表达载体，用T7 RNA聚合酶体外合成cRNA，经Ribogreen荧光定量和变性胶电泳鉴定后，将相应的cRNA注入卵母细胞，在18℃培养箱中培养3天后，用标准双电极电压钳技术测量卵母细胞的表达电流。另外，，采用CHO细胞表达系统，用LipofectAMINE方法转染真核表达质粒，继续培养24-48小时后，选择孤立的荧光细胞，应用全细胞膜片钳技术记录表达电流。所有数据均采用pCLAMP软件采集，并应用Kaleidagraph3.5和Igor软件进行数据处理。研究表明定位在HERG通道外口的三个错义突变
【图文】：

图l:构建pe训A3.l+muattion质粒图2:构建pCDNA3.l+mutation质粒单酶切鉴定结果双酶切鉴定结果1.V630川ECOR卜Hind川2.P632SIECOR!+Hind】!!V630川Bgfl2.P632SIBgll3.N633SIBgllDNAMarker(Ikbladde)r3.N633SIEcOR!+Hind!11

图3.体外合成cRNA电泳鉴定结果1.V630A2.P63253.Msrk6r4.N63355.HERGW2.HERGWTcRNA浓度对表达电流的影响为了定量分析电流，更好比较野生型和突变型之同浓度的HERGWTcRNA注射卵母细胞，3天后，母细胞表达的电流，发现cRNA的注射量与表达snaugnietti的研究结果一致，注射sngwTcRNA的
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R346;Q78

【共引文献】

相关期刊论文 前3条

1 刘远谋,王红卫,李慈珍;游离心肌细胞晚钠通道爆发型开放模式的电位依赖性[J];生理学报;1997年05期

2 徐有秋;心肌细胞电活动的离子流基础[J];心电学杂志;1986年03期

3 杨双强,谭松涛,杨朝坤,汪斌,陈力;极化停搏液用于离体大鼠心脏保存的实验研究[J];重庆医科大学学报;2005年03期

相关博士学位论文 前4条

1 杨双强;河豚毒素心脏停搏液用于离体大鼠心肌保护的实验研究[D];重庆医科大学;2005年

2 王朗;δ-氨基酮戊酸（ALA）对大鼠海马CA1区锥体神经元兴奋性和突触可塑性的作用[D];中国科学技术大学;2006年

3 汪永孝;环原黄杨碱A抗心律失常作用及其机理的研究[D];第四军医大学;1990年

4 欧绍武;人神经母细胞瘤（NB-1）细胞株TTX-R钠通道的分子克隆和功能分析[D];中国医科大学;2005年

相关硕士学位论文 前6条

1 谭松涛;阻断Na～+通道极化停搏对离体大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用[D];重庆医科大学;2003年

2 权晓强;脱中性粒细胞温血心脏停搏液心肌保护临床研究[D];郑州大学;2003年

3 杨朝坤;TTX极化心脏停搏液对离体大鼠心肌细胞保护作用及其机制的研究[D];重庆医科大学;2004年

4 郭炜;线粒体ATP敏感性钾通道在心脏低温保存中的作用研究[D];浙江大学;2005年

5 陆晓华;人体心肌细胞模型与Brugada综合症仿真研究[D];浙江大学;2005年

6 张晓芸;蝎毒耐热蛋白对大鼠海马神经元电压门控性钠通道电生理特性的影响[D];大连医科大学;2006年

本文编号：2637064