【摘要】：背景： 大量研究表明肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)在高血压和心血管疾病(CVD)发生发展和病理生理过程中起着关键的作用。Ang II作为RAS系统的主要效应肽,除了能引起血流动力学的改变外,还可以作为一种前炎症因子诱导多种炎症因子的表达,促进氧化应激水平,在AS的发生和发展过程中起着重要的作用。而巨噬源性泡沫细胞的形成是AS斑块损伤形成、发展和崩解的关键。目前发现,AngII能从多个环节上促进巨噬细胞泡沫化,包括,促进巨噬细胞摄取ox-LDL,下调ABCA1的表达,上调ACAT1的表达,并且AT1受体阻断剂(ARB)的应用可以拮抗血管紧张素Ⅱ的致泡沫化作用。但其具体调节机制仍不甚清楚。 ARB是目前临床常用的高血压一线治疗药物,除能有效降压之外,同时还具有改善胰岛素抵抗、减轻心脏重构等降压外益处,其主要作用机制为选择性阻断AT1受体,阻断血管紧张Ⅱ收缩血管、升高血压、促进醛固酮分泌、水钠潴留、交感神经兴奋等作用,并使血管紧张素Ⅱ合成反馈性增加,作用于AT2受体,产生扩血管、抗细胞增殖、调节细胞凋亡等作用。目前发现,ARB类药物中的替米沙坦、厄贝沙坦,除了可选择性阻断AT1受体外,还具有PPARγ的选择性激动作用,可能具有独立于降压作用以外的改善代谢的作用。而PPARγ/LXRα途径作为ABCA1调控机制中核心的因素,对ABCA1的表达有显著上调作用。那么具PPARγ激动作用的ARB与不具PPARγ激动作用的ARB,在逆转AngII致泡沫化作用中的机制方面是否亦有差别呢? 本实验旨在探讨AngII抑制巨噬细胞ABCA1表达的相关受体及信号通路,并以ABCA1为参照基因,在高水平AngII作用下,探讨不同血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)对ABCA1表达的影响及其作用机制。 研究目的： 1.探讨AngII对THP-1源巨噬细胞ABCG1表达的影响,同时验证AngII对THP-1源巨噬细胞ABCA1表达的抑制作用,并探讨其浓度和时间依赖关系。 2.探讨AngII抑制THP-1源巨噬细胞ABCA1表达的相关受体及信号通路。 3.在高水平AngII作用下,探讨不同血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)对ABCA1表达的影响及其作用机制。 方法： 1.实验选用THP-1单核细胞系。 2.巨噬细胞由THP-1单核细胞系经PMA诱导分化获得,巨噬细胞由CD68免疫组化染色鉴定。 3.分别用AngII不同浓度和不同作用时间对THP-1源巨噬细胞进行干预,Real-time PCR和Western Blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达。 4.在AngII干预的基础上,分别用AT1受体阻断剂缬沙坦、AT2受体阻断剂PD123319和NF-κB阻断剂TPCK预处理THP-1源巨噬细胞,Real-time PCR和、Vestern Blot检测ABCA1的mRNA和蛋白表达。 5.在AngⅡ干预的基础上,分别用替米沙坦、缬沙坦、吡咯列酮预处理THP-1源巨噬细胞；此外还分别用PPARγ抑制剂GW9662进行联合干预,Real-time PCR和Western Blot检测ABCA1的mRNA和蛋白表达。 6.统计分析：采用SPSS17.0软件进行统计分析,计量资料以X±SD表示,组间比较以one-way ANO VA进行分析。 结果： 1. THP-1细胞系在PMA诱导下,成功分化为具有吞噬功能的多形性巨噬细胞,CD68抗原免疫组化染色呈阳性反应。 2. AngII0.01μM、0.1μM、1μM均能显著抑制ABCA1mRNA和蛋白的表达(p0.01),且呈现出一定的浓度依赖性；而对ABCG1的mRNA和蛋白表达水平无影响(p0.05)。将AngII1μM分别干预24h、36h、48h,结果显示AngII自24h即开始对ABCA1表达有显著抑制作用(p0.01),并在48h达到最大,呈现出一定的时间依赖性；而对ABCG1的表达在各时间点均无影响(p0.05)。 3. AT1R阻断剂缬沙坦10μM能显著逆转AngII1μM对ABCA1mRNA和蛋白表达的抑制作用(p0.05vs. AngII组),而AT2R阻断剂PD12331910μM组与AngII组相比ABCA1的表达并无显著性差异(p0.05)；AT1R与AT2R共同阻断组同样能显著逆转AngII对ABCA1的抑制作用(p0.05vs. AngII组),但与单纯AT1R阻断组相比并无显著性差异(p0.05)。NF-κB阻断剂TPCK同样可以显著逆转AngII对ABCA1mRNA的抑制作用,但在蛋白水平,TPCK有逆转AngII抑制ABCA1蛋白表达的趋势,但无统计学意义(p=0.088vs.AngII组)。 4.替米沙坦(10μM)、缬沙坦(10μM)、吡咯列酮(10μM)均能显著逆转AngII1μM对ABCA1表达的抑制作用(p0.01vs. AngII组)；加入PPARy阻断剂GW9662联合干预能显著抑制吡咯列酮对ABCA1表达的上调作用(p0.01),而对替米沙坦10μM组与缬沙坦10μM组ABCA1的表达与各自相应组别比较无显著性差异(p0.05) 结论： 1. AngII可显著抑制THP-1源巨噬细胞ABCA1mRNA和蛋白的表达；且作用强度呈浓度和时间依赖性。 2. AngⅡ主要通过与AT1受体结合发挥其对巨噬细胞ABCA1表达的抑制作用,并且该抑制作用与NF-κB信号通路的激活相关。 3. ARB可以显著逆转AngⅡ对THP-1源巨噬细胞ABCA1表达的抑制作用,该作用几乎完全是通过阻断AT1受体实现的。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R363
【共引文献】
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