编码人新分化抗原5C5与5D4全长cDNA的克

发布时间：2020-05-13 12:01

【摘要】：分化抗原是人血细胞膜胞膜分子中的一组抗原决定簇，有着十分重要的生物学意义。迄今为止，已命名的人类白细胞分化抗原已有166个。近年来，随着分子生物学知识与技术的掺入，极大地促进了分化抗原结构与功能的研究。 本论文的目的是寻找和克隆编码新分化抗原的cDNA，测定其核苷酸顺序，，分析此序列及其编码蛋白质的性质。论文工作分两部分： 1．5C5 cDNA 数年前本实验室曾用单抗5C5和5C5-G1的混合物从一个人扁桃体细胞λgt11 cDNA文库(ATCC No.37545)筛选到一个613bp长的cDNA。由于它并非全长，我用此cDNA 5’端467bp核苷酸序列作探针，再行筛选。但从另一个人扁桃体细胞λgt11 cDNA文库(ATCC No.37546)仅筛选到一个序列完全相同的467bp cDNA。鉴于单抗5C5和5C5-G1是用人活化B细胞3D5免疫小鼠并用3D5细胞作筛选靶细胞得到的，我构建了3D5细胞的λgt11 cDNA文库。库中九噬菌体滴度为1.1×10~6，插入重组率为97.5％，插入片段大小在0.4-2.5Kb之间，平均为1.6Kb左右。用467bp cDNA做探针从3D5细胞λgt11 cDNA文库中筛选到17个阳性克隆，其中一部分克隆的插入片段长0.9Kb左右，另一部分长0.7Kb左右。测序得到长908bp和746bp两个cDNA，称5C5-1 cDNA与5C5-2 cDNA。5C5-1 cDNA中从19bp至846bp为开放阅读框架，编码276个从的蛋白质。此蛋白质从序列中有两个明显的疏水区(85-110AA或180-200AA)。跨膜结构预测95-112AA和186-208AA为两个有意义的跨膜螺旋区，跨膜方向为前者由膜内向外，后者由膜外向内。基序分析发现，5C5-1 cDNA编码蛋白质中有六种基序。2-23AA形成亮氨酸拉链结构，268-271AA为cAMP-cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点，144-152AA为酪氨酸激酶磷酸化位点，75-78为酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。另外，还有4个蛋白激酶C磷酸化位点及10个N-myristylaion位点。上述结果提示，5C5-1 cDNA编码的蛋
【图文】：

图28.5D4eDNA克隆1和克隆3的比较Fig28.ComParisonof5D4eDNAelone1andelone3克隆1eDNA序列全长1846bp(图29)。5，端。端87bp为非编码区，内含两个连续的终止密码子。AGT的一3和+4为嚓吟碱基，符合真核细胞RNA有效转录的需要。88bp至1209bp之间1122个bp组成一个完整的开放阅读框架，编码374个氨基酸的蛋白。然后是终止密码子，以及637个bp的3’非编码区，内含加尾信号AATAAA，及PolyA尾。由此可见，此DcNA序列为一完整序列。经Blasnt方式与GeBnank资料进行同源性比较，未发现有相同基因，因此申请GenBank登记，按收号为AF043290。图29中上行为5D4cDNA核普酸序列，下行为由此cDNA序列中开放阅读框架所推导出的蛋白质氨基酸序列。在此蛋白质氨基酸序列中半胧氨酸十分丰富。3.D54全长DcNA编码蛋白的同源性比较及二级结构的分析3.1同源性比较，
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1998
【分类号】：R392

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本文编号：2661926