c-Abl与泛素类似蛋白hPLIC-2的相互作用

发布时间：2020-05-17 10:32

【摘要】：人的泛素类似蛋白hPLIC-2是酵母Dsk2和鼠PLICs(proteins link IAP and cytoskeleton，PLICs)的同源类似物，作为蛋白酶体底物载体发挥作用，并可能 在蛋白酶体及泛素化的酶系之间建立功能联系。本研究通过体内、体外相互作用 研究，表明hPLIC-2可与c-Abl直接相互作用，hPLIC-2C端的UBA是hPLIC-2与 c-Abl相互作用的重要结构域。而c-Abl通过其N端片段与hPLIc-2相互作用，调 节hPLIC-2参与的蛋白质经泛素-蛋白酶体降解。体内蛋白酪氨酸磷酸化分析和体 外激酶分析表明，c-Abl不能磷酸化hPLIC-2，因此c-Abl以激酶非依赖方式与 hPLIc-2相互作用并调节蛋白质降解。即这种作用仅依赖于c-Abl或Arg蛋白的存 在，而与其激酶活性无关。本研究发现，细胞内的反应氧可以促进c-Abl与hPLIC-2 的相互作用，，可能与c-Abl在氧化应激反应中促进蛋白质降解相关：c-Abl和 hPLIC-2过量表达导致细胞内总蛋白泛素化水平升高：有趣的事，抑制hPLIC-2的 表达也可促进细胞内蛋白质的泛素化。c-Abl可促进hPLIC-2与蛋白酶体亚基结合， 从而可能促进hPLIC-2所结合泛素化蛋白的降解；c-Abl促进hPLIC-2与泛素化蛋 白结合，促进hPLIC-2在细胞内收集泛素化底物。综上所述，c-Abl通过与hPLIC-2 的相互作用可能是调控蛋白质经泛素-蛋白酶体降解的新机理。
【图文】：

构建hpLIC一2的原核表达载体pGEx一ZT-hpLIC一2。09，随机挑取的转化子经PCR和酶切鉴定(图IA，B)获隆进行测序(测序结果见附录)，结果获得插入序列与一致、且阅读框架正确的hPuC一2原核表达载体pGEx一ZT-

结果见图ZB，表明05下冲Lle一2能与olutathioneSephorase4B结合，并得到纯化。而同时纯化的蛋白和上清电泳后将蛋白转印至上，抗GST抗体免疫印迹分析，表明所表达的蛋白为GST融合蛋白，预期值相符(约92kD)(图ZC)。
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：Q55

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本文编号：2668395